[發(fā)明專利]沙門氏菌的快速恒溫檢測方法、引物組及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010017846.1
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN111073985B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉偉;李雪玲;李園園;賈犇;韋朝春;陸長德;李亦學
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市生物醫(yī)藥技術(shù)研究院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12N15/63
• 代理公司: 上海德禾翰通律師事務(wù)所 31319
• 代理人: 夏思秋

1.一種非診斷目的的針對沙門氏菌的快速恒溫檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）從待測樣品中提取基因組DNA；

（2）以所述基因組DNA為模板，以能擴增沙門氏菌基因組特異性堿基序列的引物組作為引物，在酶反應(yīng)體系下進行恒溫擴增反應(yīng)；

（3）通過判斷反應(yīng)結(jié)果是否為陽性，確定待測樣品中是否存在沙門氏菌；

其中，所述沙門氏菌基因組特異性堿基序列為GI號為194447306的沙門氏菌基因組的825116～825335 bp位序列；

其中，所述能擴增沙門氏菌基因組特異性堿基序列的引物組為引物組B或引物組B’；

引物組B：

上游外引物F3_B：5’- AATTTGCCCCAGATACGCAC -3’（SEQ ID NO：5）；

下游外引物B3_B：5’- CACCCTGACCCTGTTCAGT -3’（SEQ ID NO：6）；

上游內(nèi)引物FIP_B：5’- ACCGCCATGTTCCAGTCGGTACGCTCTCTTTAACCAGCC -3’（SEQ IDNO：7）；

下游內(nèi)引物BIP_B：5’- GCCCAGAATATCGCGGTTCACAATGCTGTTCTGGGCGTTTG -3’（SEQ IDNO：8）；

引物組B’：

上游外引物F3_B：5’- AATTTGCCCCAGATACGCAC -3’；

下游外引物B3_B：5’- CACCCTGACCCTGTTCAGT -3’；

上游內(nèi)引物FIP_B：5’- ACCGCCATGTTCCAGTCGGTACGCTCTCTTTAACCAGCC -3’；

下游內(nèi)引物BIP_B：5’- GCCCAGAATATCGCGGTTCACAATGCTGTTCTGGGCGTTTG -3’；

下游環(huán)引物LB_B：5’- ATGCTGTGTGGGGTCGTCCT -3’（SEQ ID NO：10）。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述酶反應(yīng)體系包括：1× BstDNA聚合酶反應(yīng)緩沖液，2-9mmol/L Mg²⁺，1.0-1.6mmol/L dNTP，0.8-2.0μmol/L的FIP_B和BIP_B引物，0.15-0.3μmol/L的F3_B和B3_B引物，0.16-0.64U/μL Bst DNA聚合酶，0-1.5mol/L的甜菜堿，包括或不包括0.4-1.0μmol/L的LB_B引物。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述恒溫擴增反應(yīng)的反應(yīng)程序為：① 60～65℃孵育10～90min；② 80℃終止反應(yīng)2～20min。