[發明專利]一種銀杉及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202010017137.3
• 申請日: 2020-01-08
• 公開（公告）號: CN111041121A
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 孫濤;孔德英;滕少娜;任風鳴;陸麗華;何玲;李應國;謝鑫
• 申請（專利權）人: 重慶海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686
• 代理公司: 重慶輝騰律師事務所 50215
• 代理人: 王海軍

1.一種銀杉及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒，包括、熒光探針、熒光PCR反應預混液，其特征在于：所述熒光探針的苷酸序列為SEQ ID NO.3。

2.權利要求1所述的一種銀杉及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述引物包括核苷酸序列為SEQ ID NO.1的正向引物和核苷酸序列為SEQ ID NO.2的反向引物。

3.權利要求1、2所述一種銀杉及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒的使用使用方法，包括以下步驟：制備待檢模板DNA，PCR反應體系，實時熒光PCR反應參數，結果判定等步驟；其特征在于：所述PCR反應體系為：添加10μL 2×熒光PCR反應預混液，0.4μL 10μmol/L的正向引物，0.4μL 10μmol/L的反向引物，0.5μL 10μmol/L熒光探針，2μL待檢模板DNA或陽性對照或陰性對照或空白對照，滅菌去離子水6.7μL。

4.根據權利要求3所述的一種銀杉及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒的使用使用方法，其特征在于：所述實時熒光PCR反應參數為：第一步：95℃30s；第二步：95℃5s，60℃30s，40個循環；60℃時設置FAM熒光通道采集熒光。

5.根據權利要求3所述的一種銀杉及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒的使用使用方法，其特征在于：所述制備待檢模板DNA中獲取DNA的方法為SDS法、CTAB法或磁珠法中的一種。

6.根據權利要求3所述的一種銀杉及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒的使用使用方法，其特征在于：所述結果判定為在陽性對照、陰性對照和空白對照結果均正常的情況下，被檢樣品進行檢測時：如果Ct值≤35.0，則判定為陽性；如果Ct值≥40，則判定為陰性；如果35.0＜Ct值＜40.0，則重復一次，如果再次擴增后Ct值仍為＜40.0，則判定為陽性，如果再次擴增后Ct值≥40，則判定為陰性。

7.根據權利要求6所述的一種銀杉及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒的使用使用方法，其特征在于：所述陽性對照用銀杉基因組DNA，陰性對照用馬尾松基因組DNA，空白對照用滅菌去離子水。

8.權利要求1、2、3任一項所述銀杉及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒在快速檢測銀杉及其制品中的應用。