[發明專利]核桃青皮中一種三萜化合物的制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010015879.2
• 申請日: 2020-01-08
• 公開（公告）號: CN111087441B
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 周媛媛;張淼;張曉娟
• 申請（專利權）人: 黑龍江中醫藥大學
• 主分類號: C07J71/00
• 分類號: C07J71/00;A61K31/58;A61P35/00
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本發明公開了一種從核桃青皮中分離獲得的達瑪烷型三萜化合物衍生物及其制備方法和應用，涉及醫藥技術領域，該化合物分子式為C₃₃H₅₄O₃，體外抗腫瘤活性研究表明其具有抗腫瘤活性，包括對人胃癌細胞BGC?823、人肝癌細胞HepG?2及人結腸癌細胞HT?29均具有明顯的抑制作用。本發明可以有效解決核桃青皮利用率低，被廢棄后造成環境污染等問題，同時可為抗腫瘤藥物的開發提供藥效物質基礎來源，具有重要的開發和應用價值。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種從核桃青皮中分離得到的達瑪烷型三萜化合物衍生物及其制備方法和在制備抗癌藥物上的應用。

背景技術

核桃青皮，又名青龍衣，是胡桃科胡桃屬植物胡桃樹未成熟果實的肉質果皮。其味苦，澀，性平；具有解毒殺蟲，止痛、止咳、止瀉的功效。《本草綱目》記載，核桃青皮可以用來治療白癜風及嵌甲。《急救方》稱其能治疬瘍。《山東中草藥手冊》也指出核桃青皮能解毒消腫，可用治癰腫瘡毒。現代研究表明，核桃青皮提取物可抑制體外培養的腫瘤細胞的增殖，其機理是能夠直接殺傷腫瘤細胞；不論民間還是臨床上都得到廣泛應用，如對胃癌、肝癌和結腸癌等消化道惡性癌變療效顯著，是一種前景良好的抗腫瘤藥物。但目前對其產生抗腫瘤作用的有效成分尚不確定，因此對青龍衣開展活性成分挖掘工作是十分必要的。

同時，隨著我國核桃種植規模和產量的穩步擴大，核桃加工過程帶來了大量廢棄的核桃青皮，不僅造成了資源的浪費，還帶來了環境污染。緩解這一矛盾的主要方法就是對核桃青皮開展深加工和綜合利用。

發明內容

本發明屬于醫藥技術領域，發明的目的在于提供一種新的達瑪烷型三萜化合物衍生物及其制備方法和醫藥用途，以進一步提高核桃青皮利用率并解決其被廢棄后污染環境的問題。

一種從核桃青皮中分離得到的具有抗腫瘤活性的達瑪烷型三萜化合物衍生物青龍衣三萜大環縮酮I，其化學結構式為：

分子式為C₃₃H₅₄O₃。

本發明還提供了該達瑪烷型三萜化合物衍生物的制備方法：依次通過95%乙醇提取、大孔樹脂富集純化、二氯甲烷萃取、正相硅膠柱色譜和葡聚糖凝膠柱色譜分離、重結晶制備得到。具體制備步驟如下：

（1）醇提：將核桃青皮干品，適當粉碎，然后加入95%乙醇回流提取1～3次，藥材重量與乙醇體積比為1:8～1:12，減壓回收提取液得到乙醇粗提物浸膏；

（2）大孔樹脂富集純化：將步驟（1）所得乙醇粗提物浸膏用水分散至相對密度為1.20±0.05g/mL的溶液，經AB-8或D101型大孔樹脂柱色譜富集純化，分別以30%乙醇、90%乙醇依次洗脫，收集90%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑得90%乙醇洗脫部位的浸膏；

（3）二氯甲烷萃取：將步驟（2）所得90%乙醇洗脫部位的浸膏懸浮于水中得混懸液，混懸液體積是原有90%乙醇浸膏的5倍，再用與混懸液等體積的二氯甲烷萃取5～8次，合并萃取液，回收溶劑得到二氯甲烷萃取物；

（4）正相硅膠柱色譜分離：取步驟（3）所得二氯甲烷萃取物進行正相硅膠柱色譜分離，所述硅膠柱內的拌樣硅膠為80～100目，拌樣硅膠與二氯甲烷萃取物質量比為2:1～5:1；所述硅膠柱內的裝柱硅膠為200～300目的柱層析硅膠，裝柱硅膠與二氯甲烷萃取物質量比為10:1～15:1。依次采用體積比為50:1、20:1的二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫，每一個比例洗脫5個柱體積，其中體積比為20:1的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫部分減壓回收溶劑得到分離產物；

（5）葡聚糖凝膠柱色譜分離：取經步驟（4）分離后的產物，通過葡聚糖凝膠柱，以甲醇和水體積比2:1的混合溶劑進行洗脫，洗脫5個柱體積，棄去前2個柱體積洗脫液，收集后面3個柱體積洗脫液，回收溶劑，得粗品；