[發(fā)明專利]一種用于EBV檢測的探針及檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010014973.6
• 申請日: 2020-01-07
• 公開（公告）號: CN111074002A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘石玄偉;錢剛;蔡霖霖;李振;郎秋蕾
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州聯(lián)川生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6874;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于EBV檢測的探針，屬一種RNA，其特征在于，制備過程包括以下步驟：進(jìn)行兩輪PCR反應(yīng)，每次PCR反應(yīng)后進(jìn)行磁珠純化；PCR產(chǎn)物質(zhì)控；T7體外轉(zhuǎn)錄；探針純化；探針質(zhì)控、貯藏。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其特征在于，是一種寡聚核苷酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其特征在于，所述探針被生物素標(biāo)記。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其特征在于，生物素標(biāo)記探針中的尿嘧啶。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其特征在于，所述的第一輪PCR正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其特征在于，所述的第一輪PCR反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其特征在于，所述的T7體外轉(zhuǎn)錄PCR引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其特征在于，所述的兩次PCR反應(yīng)過程包括活化步驟、變性步驟、退火步驟、延伸步驟和保持步驟。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其特征在于，所述的兩次PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)條件分別如下：

1)使用PCR引物進(jìn)行第一輪PCR反應(yīng)，PCR反應(yīng)體系如下：

在PCR儀中執(zhí)行以下反應(yīng)程序

2)使用PCR引物進(jìn)行第二輪PCR反應(yīng)，PCR反應(yīng)體系如下：

第二次PCR反應(yīng)程序如下：

。

10.一種用于HPV的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：制備DNA模板，片段化基因組DNA，純化片段化產(chǎn)物，基因組文庫構(gòu)建，PCR擴(kuò)增基因組文庫，權(quán)利要求1所述探針與基因組文庫雜交，磁珠捕獲雜交產(chǎn)物，對得到的捕獲產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序及結(jié)果分析。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述的待測樣品為血液、組織、細(xì)胞和唾液等中的一種多種。

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述的磁珠捕獲雜交產(chǎn)物步驟選用的是鏈霉親和素磁珠。

13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述的文庫構(gòu)建步驟涉及多個(gè)試劑盒，試劑盒包括如下試劑：

試劑盒1：VariantBaits^TM Target Enrichment Library Prep Kit(96反應(yīng))

試劑盒2：VariantBaits^TM Target Enrichment HybAmp Kit(96反應(yīng))

試劑盒3：VariantBaits^TM Target Enrichment AdapterBlock Oligo(96反應(yīng))

試劑盒4：VariantBaits^TM Target Enrichment Wash Kit(96反應(yīng))

試劑盒5：VariantBaits^TM Target Enrichment Probe(96反應(yīng))

試劑名稱 體積 保存溫度

VB Probe 0.48mL -80℃

試劑盒6：VariantBaits^TM Target Enrichment Purification Beads(96反應(yīng))

試劑名稱 體積 保存溫度

LC磁珠 35mL 4℃。

14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增基因組文庫反應(yīng)體系及反應(yīng)條件是：

1)PCR反應(yīng)體系：

2)PCR反應(yīng)程序如下：

。