[發明專利]一種用于EBV檢測的探針及檢測方法

在審

• 申請號: 202010014973.6
• 申請日: 2020-01-07
• 公開（公告）號: CN111074002A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 潘石玄偉;錢剛;蔡霖霖;李振;郎秋蕾
• 申請（專利權）人: 杭州聯川生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6874;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于EBV檢測的探針，屬一種RNA，其特征在于，制備過程包括以下步驟：進行兩輪PCR反應，每次PCR反應后進行磁珠純化；PCR產物質控；T7體外轉錄；探針純化；探針質控、貯藏。

2.根據權利要求1所述的探針，其特征在于，是一種寡聚核苷酸。

3.根據權利要求1所述的探針，其特征在于，所述探針被生物素標記。

4.根據權利要求1所述的探針，其特征在于，生物素標記探針中的尿嘧啶。

5.根據權利要求1所述的探針，其特征在于，所述的第一輪PCR正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

6.根據權利要求1所述的探針，其特征在于，所述的第一輪PCR反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

7.根據權利要求1所述的探針，其特征在于，所述的T7體外轉錄PCR引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

8.根據權利要求1所述的探針，其特征在于，所述的兩次PCR反應過程包括活化步驟、變性步驟、退火步驟、延伸步驟和保持步驟。

9.根據權利要求1所述的探針，其特征在于，所述的兩次PCR反應體系及反應條件分別如下：

1)使用PCR引物進行第一輪PCR反應，PCR反應體系如下：

在PCR儀中執行以下反應程序

2)使用PCR引物進行第二輪PCR反應，PCR反應體系如下：

第二次PCR反應程序如下：

。

10.一種用于HPV的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：制備DNA模板，片段化基因組DNA，純化片段化產物，基因組文庫構建，PCR擴增基因組文庫，權利要求1所述探針與基因組文庫雜交，磁珠捕獲雜交產物，對得到的捕獲產物進行高通量測序及結果分析。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述的待測樣品為血液、組織、細胞和唾液等中的一種多種。

12.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述的磁珠捕獲雜交產物步驟選用的是鏈霉親和素磁珠。

13.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述的文庫構建步驟涉及多個試劑盒，試劑盒包括如下試劑：

試劑盒1：VariantBaits^TM Target Enrichment Library Prep Kit(96反應)

試劑盒2：VariantBaits^TM Target Enrichment HybAmp Kit(96反應)

試劑盒3：VariantBaits^TM Target Enrichment AdapterBlock Oligo(96反應)

試劑盒4：VariantBaits^TM Target Enrichment Wash Kit(96反應)

試劑盒5：VariantBaits^TM Target Enrichment Probe(96反應)

試劑名稱 體積 保存溫度

VB Probe 0.48mL -80℃

試劑盒6：VariantBaits^TM Target Enrichment Purification Beads(96反應)

試劑名稱 體積 保存溫度

LC磁珠 35mL 4℃。

14.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述的PCR擴增基因組文庫反應體系及反應條件是：

1)PCR反應體系：

2)PCR反應程序如下：

。