[發明專利]一種待測樣品中二巰基聚乙二醇殘留量的檢測方法

有效

• 申請號: 202010014269.0
• 申請日: 2020-01-07
• 公開（公告）號: CN111122742B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 李帥;劉珊;邱永鋒;張延良
• 申請（專利權）人: 上海景峰制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86;G01N30/60
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種待測樣品中二巰基聚乙二醇殘留量的檢測方法，所述檢測方法包括利用超高效液相色譜法進行檢測。本發明提供的檢測方法檢測準確性高，檢測靈敏度好。

技術領域

本發明屬于化學分析技術領域，涉及一種待測樣品中二巰基聚乙二醇殘留量的檢測方法。

背景技術

二巰基聚乙二醇殘留量的測定方法有毛細管電泳法、液相色譜-質譜聯用法等，也可采用紫外-可見光譜法或者熒光光譜法。然而，毛細管電泳法、液相色譜-質譜聯用法，紫外光譜法的靈敏度和準確度比較低，但是這種方法簡單、快速，并且反應條件溫和，且可以同時測定總的自由巰基而被大家廣泛采用。其中Ellman試劑應用最為廣泛，中國藥典里面收載的蛋白質中自由巰基的含量測定方法即采用該法。但當該方法測定自由巰基的殘留時，即測定某種物質中二巰基聚乙二醇的痕量時，該方法就存在靈敏度太低的問題。而在某些反應中，尤其該物質作為起始物料或中間物質時，由于多余二巰基聚乙二醇物質等，需要嚴格控制其殘留。

CN102759586A公開了一種高效液相色譜法測定組合物中巰基化合物含量的方法，公開了甲酸在使用高效液相色譜分析法測定組合物中巰基化合物的含量時作為穩定劑的應用，流動相為含有甲酸的水相與有機相的混合物該專利申請并不能準確檢測殘留的痕量自由巰基的含量。CN106770843A公開了一種測定自由巰基含量的方法，所述方法包括以下步驟：將供試品溶液進樣至高效液相色譜儀中進行色譜分離，而后經過衍生儀時在衍生試劑的作用下進行衍生，由紫外檢測器采集液相色譜數據；利用已知自由巰基濃度的對照品溶液作為對照；通過供試品溶液的液相色譜峰面積與已知自由巰基濃度的對照品溶液的液相色譜峰面積的比較，計算得到供試品中自由巰基的含量。該專利申請利用了柱后衍生檢測自由巰基含量，但是存在一系列問題。

柱后衍生又稱柱后反應(Post-column Derivatization)，利用衍生反應使被測物與相應的試劑分析反應，以改變其物理或化學性質，使其被檢測到。該方法存在以下缺陷：得到的二巰基聚乙二醇的色譜峰，對稱因子和拖尾因子偏大，而且觀察到峰形略有塌陷，這些色譜峰形的缺陷，都會使得檢測結果的波動性偏大；衍生物和衍生劑均在色譜柱上不保留，這兩種物質不能在色譜圖上實現基線分離；在樣品主峰的位置空白中有干擾，雖然目前可以用扣除空白的方法計算樣品中的二巰基聚乙二醇的含量，但是比較繁瑣。

因此，需要提供一種新的關于二巰基聚乙二醇殘留量的檢測方法來滿足應用要求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種待測樣品中二巰基聚乙二醇殘留量的檢測方法。本發明提供的檢測方法檢測準確性高，檢測靈敏度好。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種待測樣品中二巰基聚乙二醇殘留量的檢測方法，所述檢測方法包括利用超高效液相色譜法進行檢測。

相比于高效液相色譜法，本發明采用超高效液相色譜法對待測樣品進行檢測，具有改善峰形的有益效果。

在本發明中，所述檢測方法包括如下步驟：

(1)將待測樣品與衍生試劑混合進行衍生化反應；

(2)將步驟(1)經過衍生后的待測樣品利用超高效液相色譜法進行色譜分析，得到待測樣品的色譜峰；

(3)利用已知二巰基聚乙二醇的量的對照品經過與步驟(1)和步驟(2)所述待測樣品相同的處理，得到對照品的色譜峰；

(4)通過待測樣品的色譜峰面積與對照品的色譜峰面積的比較、計算，得到所述待測樣品中二巰基聚乙二醇殘留量。

在本發明中，通過柱前衍生化法，并且利用超高效液相色譜法，對待測樣品中的二巰基聚乙二醇殘留量進行檢測分析，具有操作便捷，分析快速的有益效果。

在本發明中，所述衍生試劑為磷酸鈉-EDTA緩沖液，其中還包括5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)。