[發明專利]一種用于準確測定血清中膽汁酸濃度的質譜試劑盒

在審

• 申請號: 202010012609.6
• 申請日: 2020-01-07
• 公開（公告）號: CN111474288A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 鄒繼華;沈敏;楊曉東;屠敏敏;鄒炳德
• 申請（專利權）人: 美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 寧波甬致專利代理有限公司 33228
• 代理人: 沈春紅

一種用于準確測定血清中膽汁酸濃度的質譜試劑盒，其特征在于：包括含有15種膽汁酸的校準品，脫氧膽酸?d4、甘氨脫氧膽酸?d4和牛磺脫氧膽酸?d4的內標，15種膽汁酸的質控品，提取液，流動相，復溶液。具有無需進行復雜的凈化提純步驟，而且所需樣本量小，可與液相色譜儀串聯質譜儀配套使用，應用于臨床樣本的檢驗；同時，該產品能同時檢測15種不同結構的膽汁酸，達到單樣本多指標同步檢測功能，具有準確率高、檢測時間短、試劑耗用量少、操作方便等特點；此外，測量結果可直接溯源至參考系統，從而保證其測量結果的準確性的優點。

技術領域

本發明涉及醫學檢驗技術領域，具體涉及一種用于準確測定血清中膽汁酸濃度的質譜試劑盒。

背景技術

膽汁酸(bilo acid，BA)是膽汁的主要成分，由肝臟合成，是內源性膽固醇的主要代謝去路；也是脂類物質消化、吸收必不可少的物質。膽汁酸按結構分為：游離型膽汁酸，包括膽酸(cholic acid，CA)、脫氧膽酸(deoxycholic acid，DCA)、鵝脫氧膽酸(chenodeoxycholic acid，CDCA)、熊脫氧膽酸(ursodeoxycholic acid，UDCA)和石膽酸(1ithocholic acid，LCA)等；結合型膽汁酸，主要是游離型膽汁酸與甘氨酸或牛磺酸結合的產物。按來源分為初級膽汁酸(肝細胞內合成)和次級膽汁酸(腸道中合成)。人體膽汁酸代謝異常與肝膽系統疾病以及能引起膽汁酸代謝異常的其它疾病如動脈粥炎硬化、高血壓等多種疾病的發生相關，血清膽汁酸的成分及其含量的檢測，對于了解機體膽汁酸的代謝特點具有重要的臨床意義。

肝臟在膽汁酸代謝中占重要地位，肝細胞與膽汁酸的生物合成、分泌、攝取、加工和轉化有密切關系。當肝細胞損傷或膽道阻塞時都會引起膽汁酸代謝的改變，因此，膽汁酸是反映各種原發性和繼發性肝損傷的靈敏指標。每個人的BA水平都隨著生理和病理狀態的變化而發生改變，且不同疾病時各種膽汁酸變化的趨勢和程度不同。BA的毒性與其生化特征如臨界微粒濃度和疏水性有關，單羥基BA毒性最大，其次是雙羥基BA，三羥基BA毒性最小。每一種BA都可各自作為配體激活其相應的受體，這些受體包括TGR5、FXR、PXR、PPARα、CAR、VDR等。因此，血清中膽汁酸的種類和濃度的測定在研究膽汁酸誘導的肝膽疾病的發病機理及各種肝損傷的診斷與鑒別診斷中具有不可替代的作用，檢測每一種BA的體內水平而非簡單地定量總BA含量，對于了解BA相關的生理和病理狀態是非常重要的。

生物體液中膽汁酸種類多，含量低，結構上具有相似性(如CDCA、DCA、UDCA)，對其測定比較困難，目前只開展總膽汁酸檢測，臨床上膽汁酸的測定方法主要有循環酶法、高效液相色譜法(HPLC)、毛細管區帶電泳、電動色譜、氣相色譜(GC)、氣質聯用法(GC/MS)和液質聯用法(LC-MS/MS)。氣相色譜和GC-MS已被用于定性和定量分析BA。GC-MS分析BA異構體時具備高的選擇性和分辨率。然而，這個技術受到諸多限制，主要是復雜的樣品制備，衍生化，尤其是需將結合型BA水解成非結合形式才能進行分析。因此，盡管液相色譜分辨率不如GC，可能不能分離所有的BA異構體，高效液相色譜(HPLC)方法仍然適用更廣。高效液相串聯紫外檢測(HPLC-UV)法常被用來測定生物基質中的BA。這個方法的缺點是在復雜生物基質中UV檢測的靈敏度和特異性不足。HPLC可串聯更靈敏和選擇性更高的檢測器進行使用，如熒光檢測器。然而熒光檢測法需復雜的衍生化技術而不能推廣。LC-MS/MS是近年來迅速發展的定量分析技術，由于具有的高選擇性、高靈敏度、樣品處理簡單和自動化程度高的特點，日漸成為生物樣品中微量物質檢測的首選方法，同時，由于該技術具有精密度好，準確度高，特異性強等優點，也被用做參考測量程序的建立及校準常規檢測系統，保證檢驗結果的準確性。目前，國內質譜技術用于膽汁酸譜檢測主要集中在第三方檢測公司和少數三甲醫院。質譜臨床檢驗方法均為實驗室自行建立的方法((laboratory developed tests,LDT)，采用的試劑多為非試劑盒產品，檢測方法難以溯源到參考物質或參考方法，檢測結果的準確度、重復性、時間可比性有待臨床進一步驗證。因此，迫切需要商品化的質譜檢測試劑盒。

發明內容