[發明專利]一種利用酶標儀快速測定煙草中葡萄糖含量的方法

在審

• 申請號: 202010012516.3
• 申請日: 2020-01-07
• 公開（公告）號: CN111157472A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 彭麗娟;王春瓊;李苓;楊龍祥
• 申請（專利權）人: 云南省煙草質量監督檢測站
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/44
• 代理公司: 昆明協立知識產權代理事務所(普通合伙) 53108
• 代理人: 謝嘉

1.一種利用酶標儀快速測定煙草中葡萄糖含量的方法，具體采用以下步驟：

(1)樣品前處理：

將煙草或煙草制品置于烘箱中，40℃烘干至可用手指捻碎，取出用粉碎機研磨，過40目篩后得到煙末樣品，取0.1g煙末樣品于三角瓶中，加20mL水萃取樣品中的葡萄糖，振蕩30min后過濾得到濾液，作為待測樣品溶液備用；

(2)繪制標準工作曲線：

準確配制濃度為5.55mmol/L的葡萄糖標液，分別移取該葡萄糖標液5、25、50、75、100和150μL置于2mL微量離心管中，在每個離心管中分別加入葡萄糖氧化酶-過氧化物酶試劑盒(以下簡稱：試劑盒)中的試劑R₁和R₂各1000μL混勻，于37℃水浴顯色15min后分別轉移至96孔酶標板的不同位置，得到葡萄糖濃度分別為0.014、0.069、0.135、0.201、0.264、0.387mmol/L的標準工作液，以溶液的葡萄糖濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，得到標準工作曲線方程：y＝2.941x+0.059，相關系數r²＝0.996；

(3)分析方法：

取待測樣品溶液100μL置于2mL微量離心管中，分別加入試劑盒中的試劑R₁和R₂各1000μL混勻，于37℃水浴顯色15min，轉移至96孔酶標板中，以蒸餾水分析液為參比，用酶標儀于波長505nm處測定吸光度，由標準工作曲線推算出待測樣品溶液的葡萄糖濃度；

(4)結果計算：

將待測樣品溶液的葡萄糖濃度值代入公式(1)，計算待測樣品的葡萄糖含量，并以兩次平行測定的平均值作為最終的測定結果；

P—待測樣品中的葡萄糖含量，單位為百分比(％)；

C_待測—待測樣品溶液的葡萄糖濃度，單位為毫摩爾每升(mmol/L)；

V_R1—試劑盒R₁試劑的加入體積，單位為毫升(mL)；

V_R2—試劑盒R₂試劑的加入體積，單位為毫升(mL)；

V_樣品—待測樣品溶液的加入體積，單位為毫升(mL)；

V_萃取—樣品萃取劑的體積，單位為毫升(mL)；

0.18016—葡萄糖的物質的量，單位為克每毫摩爾(g/mmol)；

m—待測樣品質量，單位為克(g)；

w—待測樣品水份含量，單位為百分比(％)。