[發明專利]一種聯合型代謝標志物的篩選方法及應用

在審

• 申請號: 202010008952.3
• 申請日: 2020-01-06
• 公開（公告）號: CN111157563A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 高麗;王柯欣;杜冠華;秦雪梅
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08
• 代理公司: 太原申立德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14115
• 代理人: 程園園

1.一種聯合型代謝標志物，其特征在于：由馬尿酸、肌酸、腐胺、膽堿和牛磺酸共同構成。

2.根據權利要求1所述的一種聯合型代謝標志物，其特征在于：所述聯合型代謝標志物來源于尿液。

3.一種聯合型代謝標志物的篩選方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1，二乙基亞硝胺肝癌模型的復制與評價：將大鼠隨機分為空白對照組與二乙基亞硝胺肝癌模型組，肝癌模型組大鼠自由飲用60mg/L由滅菌水配置的二乙基亞硝胺溶液，每天按照飲用情況更換，建立原發性肝癌大鼠模型；通過肝組織病理切片與肝功指標進行二乙基亞硝胺肝癌模型評價；

步驟2，差異代謝物的尋找：在不同時間段收集各組大鼠的尿液樣品，對尿液進行核磁共振分析，歸屬代謝物；同時收集不同時間段各組大鼠血清樣品進行肝功指標測定；核磁圖譜轉換為數據矩陣，導入到SIMCA-P軟件進行差異代謝物的尋找；

步驟3，通過計算各差異代謝物的變化率，并結合主成分分析、累計方差貢獻率分析方法，確定肝癌病變進程的進展性標志物；

步驟4，通過ROC曲線下面積，評估進展性標志物的診斷準確性，對于曲線下面積大于0.7的進展性標志物，作為反映肝癌病變進程的代謝標志物。

4.根據權利要求3所述的一種聯合型代謝標志物的篩選方法，其特征在于：所述步驟2，差異代謝物的尋找：在不同時間段收集各組大鼠的尿液樣品，對尿液進行核磁共振分析，歸屬代謝物；同時收集不同時間段各組大鼠血清樣品進行肝功指標測定；核磁圖譜轉換為數據矩陣，導入到SIMCA-P軟件進行差異代謝物的尋找的具體操作方法為：對所有圖譜中以TSP校準化學位移，以δ0.01對化學位移區間δ0.30-9.50進行分段積分，排除δ4.70-5.00區域的水峰不進行積分，并將積分數據進行歸一化；最終導出積分數據矩陣；對不同時間空白對照組與二乙基亞硝胺肝癌模型組尿液代謝輪廓數據進行偏最小二乘法判別分析和正交偏最小二乘法判別分析，對OPLS-DA結果進行分析，得到VIP值，選出VIP＞1的代謝產物，依據S-plot圖并結合獨立樣本t檢驗P＜0.05篩選出差異代謝物。

5.根據權利要求3所述的一種聯合型代謝標志物的篩選方法，其特征在于：所述步驟3，通過計算各差異代謝物的變化率，并結合主成分分析、累計方差貢獻率分析方法，確定肝癌病變進程的進展性標志物的具體操作方法為：以不同時間點為橫坐標，以各差異代謝物相對含量的變化率為縱坐標，分別對各差異代謝物進行線性回歸分析，選擇實驗進程中變化趨勢一致的差異代謝物，作為潛在進展性標志物；以潛在進展性標志物為變量進行PCA分析，依據各潛在進展性標志物的累計方差貢獻率達到100％，篩選出主要的主成分貢獻變量，進一步篩選出潛在進展性標志物。

6.根據權利要求5所述的一種聯合型代謝標志物的篩選方法，其特征在于：所述以潛在進展性標志物為變量進行PCA分析，依據各潛在進展性標志物的累計方差貢獻率達到100％，篩選出主要的主成分貢獻變量，進一步篩選出潛在進展性標志物的具體過程為：以整個實驗周期中變化趨勢一致的潛在進展性標志物為變量進行PCA分析，依據各潛在進展性標志物在不同因子上的載荷，選擇載荷值0.80，得出牛磺酸、膽堿、腐胺、肌酸和馬尿酸為主要的主成分貢獻變量，可作為潛在進展性標志物。

7.一種聯合型代謝標志物的應用，其特征在于：應用于制備肝癌病變進程診斷鑒別試劑中。