[發明專利]一種聯合型代謝標志物的篩選方法及應用

在審

• 申請號: 202010008952.3
• 申請日: 2020-01-06
• 公開（公告）號: CN111157563A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 高麗;王柯欣;杜冠華;秦雪梅
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08
• 代理公司: 太原申立德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14115
• 代理人: 程園園

本發明屬于肝癌標志物篩選鑒定技術領域，具體涉及一種聯合型代謝標志物的篩選方法及應用。為解決現有技術不能及早診斷肝癌的缺點，從而針對性地評價肝癌的發病進程，提供了一種聯合型代謝標志物的篩選方法及應用。本發明聯合型代謝標志物為馬尿酸、肌酸、腐胺、膽堿和牛磺酸的組合，本發明聯合型代謝標志物源于尿液。本發明聯合型代謝標志物可用于在制備肝癌病變進程診斷鑒別試劑中。本發明通過檢測終端產物尿液中內源性生物標志物含量的動態變化過程，篩選能反映肝癌病變進程的生物標志物，目的是解決當前對肝癌病變進程診斷不及時的問題，最終依據確定的進展性標志物對肝癌模型早期病變及病程進行評價。

技術領域

本發明屬于肝癌標志物篩選鑒定技術領域，具體涉及一種聯合型代謝標志物的篩選方法及應用。

背景技術

肝癌是世界上流行最高的10種惡性腫瘤之一，死亡率在消化系統惡性腫瘤中位居第二，發病率有上升趨勢，而我國每年新發病例占全球一半以上。肝癌是指發生于肝臟的惡性腫瘤，包括原發性肝癌和轉移性肝癌兩種，人們日常說的肝癌指的多是原發性肝癌。原發性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，根據最新統計，全世界每年新發肝癌患者約八十萬，居惡性腫瘤的第五位。

二乙基亞硝胺誘導的大鼠肝癌模型因其誘發肝癌的過程與人類肝癌十分相似，且誘癌成功率高，因此被廣泛用于制備大鼠肝癌模型。通常情況下，通過檢測模型組大鼠肝功能指標的水平判斷模型的損傷程度，依據肝臟組織病理學檢查確定肝癌的病理類型及病變程度，然而，血清生化指標及病理檢測操作繁瑣且費用昂貴，費時費力。目前尚無肝癌病變進程動態評價方法，因此需要建立一種整體、非入侵、快速、靈敏度高、專屬性好的方法，用以動態反映疾病的病程，用于肝癌的診斷。

代謝組學是一種用于綜合分析生物基質中內源性代謝物變化的系統性方法，目前在很多領域都有極為重要的應用，如新藥研發、藥物毒理研究和安全性評價、生物標志物發現以及疾病的早期診斷、個性化治療等眾多領域。尿液可以無創傷的獲得大量樣本，在診斷便捷性、經濟性和微創性方面優勢明顯。

發明內容

針對現有技術不能及早發現確診肝癌缺點，檢測操作繁瑣，費時費力的問題，本發明提供了一種聯合型代謝標志物的篩選方法及應用。

為了達到上述目的，本發明采用了下列技術方案：

一種聯合型代謝標志物，由馬尿酸、肌酸、腐胺、膽堿和牛磺酸共同構成。

進一步，所述聯合型代謝標志物來源于尿液。本發明選擇的尿液作為代謝組學研究的樣本，臨床取材方便，對患者損傷小。

一種聯合型代謝標志物的篩選方法，包括以下步驟：

步驟1，二乙基亞硝胺肝癌模型的復制與評價：將大鼠隨機分為空白對照組與二乙基亞硝胺肝癌模型組，肝癌模型組大鼠自由飲用60mg/L由滅菌水配置的二乙基亞硝胺溶液，每天按照飲用情況更換，建立原發性肝癌大鼠模型；通過肝組織病理切片與肝功指標進行二乙基亞硝胺肝癌模型評價；

步驟2，差異代謝物的尋找：在不同時間段收集各組大鼠的尿液樣品，對尿液進行核磁共振即Nuclear Magnetic Resonance，NMR分析，歸屬代謝物；同時收集不同時間段各組大鼠血清樣品進行肝功指標測定；核磁圖譜轉換為數據矩陣，導入到SIMCA-P軟件進行差異代謝物的尋找；

步驟3，通過計算各差異代謝物的變化率，并結合主成分分析、累計方差貢獻率分析方法，確定肝癌病變進程的進展性標志物；

步驟4，通過ROC曲線下面積，評估進展性標志物的診斷準確性，對于曲線下面積大于0.7的進展性標志物，作為反映肝癌病變進程的代謝標志物。ROC曲線通過對不同的診斷界值下的靈敏度-特異度曲線進行全面比較，能比較客觀的反映診斷系統的效能。