[發(fā)明專利]一種YAP1基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010007670.1
• 申請(qǐng)日: 2020-01-05
• 公開（公告）號(hào): CN111073858A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹紅翠;馮旭東;俞炯;潘巧玲;楊金鳳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/867;C12N15/85;C12N5/0775
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

1.一種YAP1基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞，其特征在于，是以過表達(dá)YAP1基因修飾的原代間充質(zhì)干細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞，其特征在于，所述YAP1基因來源于YAP1慢病毒載體或YAP1質(zhì)粒載體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞，其特征在于，所述原代間充質(zhì)干細(xì)胞的來源是下述任意一種人體組織：胎盤、臍帶或脂肪組織。

4.權(quán)利要求1所述YAP1基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)取含有原代間充質(zhì)干細(xì)胞的胎盤、臍帶或脂肪組織，剪取小塊；在培養(yǎng)皿上用磷酸鹽緩沖液清洗至清洗液透明后，充分剪碎；

(2)將剪碎的組織塊轉(zhuǎn)移至50毫升離心管內(nèi)，加入25毫升質(zhì)量/體積濃度為0.1％的膠原酶Ⅳ，放在37℃恒溫的搖床上搖晃消化30分鐘；

(3)向消化好的組織中加入20毫升磷酸鹽緩沖液，混勻后經(jīng)100微米篩網(wǎng)過濾；將濾液在1200轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，去上清液保留細(xì)胞沉淀；

(4)向細(xì)胞沉淀中加入5毫升含有20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，混勻后接種至T25培養(yǎng)瓶；然后置于5％CO₂、37℃恒溫的培養(yǎng)箱中；每隔3天換一次新鮮的含有20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基；

(5)待細(xì)胞50％匯合后，以感染復(fù)數(shù)為50∶1加入YAP1慢病毒載體或YAP1質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞；完成轉(zhuǎn)染后得到過表達(dá)YAP1基因修飾的原代間充質(zhì)干細(xì)胞YAP1-LV-MSC。