[發明專利]一種志賀氏菌的穩定劑及其應用

有效

• 申請號: 202010007331.3
• 申請日: 2020-01-04
• 公開（公告）號: CN111100814B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 徐環;蔡芷荷;盧勉飛;萬強;吳清平;李艷嫦;李遠強
• 申請（專利權）人: 廣東環凱生物科技有限公司;廣東環凱微生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12Q1/10;C12Q1/06;C12R1/01
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

本發明提供一種志賀氏菌的穩定劑，包含以下原料：植酸、谷氨酸鈉、脫脂奶粉、甘油、甘露醇。本發明的志賀氏菌質控菌的穩定劑，可使質控菌凍干存活率達到90％以上，且能夠在長期儲存過程中保持細菌含量的穩定性。

技術領域

本發明微生物質量控制領域，尤其涉及一種志賀氏菌的穩定劑及其應用。

背景技術

真空冷凍干燥技術于上世紀70年代初期開始研發，現已商業化生產。冷凍干燥是將菌體在共溶點以下預凍，然后在低于三相點壓力的高度真空狀態下，使菌品中的冰升華，最后達到干燥的目的。但是在冷凍干燥過程中，易造成部分微生物細胞的損傷、死亡及某些酶蛋白分子的鈍化，許多研究發現在細菌凍干前加入適當的物質能起到保護作用，即有效保護劑的使用對于細菌的冷凍干燥是成功的關鍵。在凍干過程中添加保護劑，在很大程度上可減輕或避免冷凍干燥對細胞帶來的損傷。保護劑可以減輕或防止冷凍干燥或復水對細胞的損害，盡可能保持其原有的生理、生化特性和生物活性。

志賀氏菌是一種革蘭氏陰性短桿菌，易引起人類細菌性痢疾，臨床表現為發熱、腹痛、腹瀉等癥狀，是常見的腸道致病菌。該菌廣泛存在于禽肉、果蔬和乳制品等，感染劑量較低，僅需要10CFU以上的活菌就可能引起感染，因此對人類危害較大。現行食品微生物檢驗標準對志賀氏菌的檢驗流程進行了規范。而質控菌株是微生物檢驗中的陽性對照，能夠驗證檢驗方法、對檢驗人員進行能力驗證、驗收微生物培養基，保證微生物實驗過程的質量控制，是微生物檢驗過程中的標準物質。定量質控菌株由于其使用方便，快速，提高檢驗效率等多種優點，是目前微生物檢驗過程質控標準物質的發展趨勢。

目前還沒有針對志賀氏菌定量質控菌株的制備方法，關鍵原因在于目前還未有一種穩定劑能夠使志賀氏菌在凍干過程不受損失，且提高志賀氏菌在長期儲存以及短期運輸過程的穩定性。因此，提供一種志賀氏菌的穩定劑及志賀氏菌定量質控菌的制備方法，具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種志賀氏菌的穩定劑及其應用。

本發明所采取的技術方案是：

本發明的第一個方面，提供：

一種志賀氏菌的穩定劑，溶劑為水，其溶質包含以下原料：植酸、谷氨酸鈉、脫脂奶粉、甘油、甘露醇。

在一些實例中，其溶質的質量組成為：2～4份植酸、1～3份谷氨酸鈉、10～12份脫脂奶粉、1～3份的甘油、1～3份甘露醇。

在一些實例中，其溶質的質量組成為2％～4％植酸、1％～3％谷氨酸鈉、10％～12％脫脂奶粉、1％～3％甘油、1％～3％甘露醇。

在一些實例中，其溶質的質量組成為2％～4％植酸、1％～3％谷氨酸鈉、10％～12％脫脂奶粉、1％～2％甘油、1％～3％甘露醇。

本發明的第二個方面，提供：

一種志賀氏菌定量化質控品，由志賀氏菌與上述的穩定劑混勻后，定量后分裝、凍干得到。

在一些實例中，志賀氏菌菌液與穩定劑(干重)的混合比為1000CFU/(0.1-0.3)g穩定劑(干重)。這樣可以保證細菌可以充分被穩定劑保護，同時也不會過于浪費穩定劑。

在一些實例中，上述的定量化質控品中志賀氏菌的含量為300～1000CFU/支。當然，也可以根據實際的需要，選擇其他的含量。該菌含量的偏差不大于20％。

本發明的第三個方面，提供：

一種志賀氏菌定量質控品的制備方法，包括如下步驟：

(1)菌株復蘇：志賀氏菌接種至復蘇培養基，復蘇傳代；

(2)增菌：復蘇的志賀氏菌接種至增殖培養基中，培養增殖，得志賀氏菌菌液；