[發(fā)明專利]霍亂弧菌O1群的快速恒溫檢測方法、引物組及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010004057.4
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN110964789A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹永梅;李園園;劉偉;李雪玲;賈犇;韋朝春;陸長德;李亦學(xué)
• 申請（專利權(quán)）人: 上海旺旺食品集團(tuán)有限公司;上海產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63
• 代理公司: 上海麥其知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.一種針對霍亂弧菌O1群的快速恒溫檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)從待測樣品中提取基因組DNA；

(2)以所述基因組DNA為模板，以能擴(kuò)增霍亂弧菌O1群基因組特異性堿基序列的引物組作為引物，在酶反應(yīng)體系下進(jìn)行恒溫擴(kuò)增反應(yīng)；

(3)通過判斷反應(yīng)結(jié)果是否為陽性，確定待測樣品中是否存在霍亂弧菌O1群；

其中，所述霍亂弧菌O1群基因組特異性堿基序列為GI號為15640032的霍亂弧菌O1群基因組的170082～171001bp位序列；

其中，所述能擴(kuò)增霍亂弧菌O1群基因組特異性堿基序列的引物組為引物組B或引物組B’；

引物組B：

上游外引物F3_B：5’-CCTCTGGTCTCTTTGACTAAGG-3’(SEQ ID NO：5)；

下游外引物B3_B：5’-AGTTTCACGCCTTGCTCAC-3’(SEQ ID NO：6)；

上游內(nèi)引物FIP_B：5’-TCGGGAAAATGTAGGTCGCCACCGAAATCAAAACGGCTGGC-3’(SEQ IDNO：7)；

下游內(nèi)引物BIP_B：5’-CGGCGGATGGTAAAAACAAAGCAGAAATGGCCCGGTACCAGAG-3’(SEQ IDNO：8)；

引物組B’：

上游外引物F3_B：5’-CCTCTGGTCTCTTTGACTAAGG-3’；

下游外引物B3_B：5’-AGTTTCACGCCTTGCTCAC-3’；

上游內(nèi)引物FIP_B：5’-TCGGGAAAATGTAGGTCGCCACCGAAATCAAAACGGCTGGC-3’；

下游內(nèi)引物BIP_B：5’-CGGCGGATGGTAAAAACAAAGCAGAAATGGCCCGGTACCAGAG-3’；

下游環(huán)引物L(fēng)B_B：5’-AGCACGGTAACTCTTTTGCCTCTG-3’(SEQ ID NO：17)。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述酶反應(yīng)體系包括：1×BstDNA聚合酶反應(yīng)緩沖液，2-9mmol/L Mg²⁺，1.0-1.6mmol/L dNTP，0.8-2.0μmol/L的FIP_B和BIP_B引物，0.15-0.3μmol/L的F3_B和B3_B引物，0.16-0.64U/μL Bst DNA聚合酶，0-1.5mol/L的甜菜堿，包括或不包括0.4-1.0μmol/L的LB_B引物。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述恒溫擴(kuò)增反應(yīng)的反應(yīng)程序為：①60～65℃孵育10～90min；②80℃終止反應(yīng)2～20min。