[發明專利]一種TIL細胞的制備方法、試劑盒和試劑套裝

在審

• 申請號: 202010004051.7
• 申請日: 2020-01-03
• 公開（公告）號: CN111073853A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 張濤
• 申請（專利權）人: 北京薈科柘生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467
• 代理人: 王欣

本說明書實施例公開了一種TIL細胞的制備方法、試劑盒和試劑套裝，該方案包括：采用CD3和RN對用于培養TIL細胞的培養瓶進行預處理；基于新鮮的肝素抗凝的患者腹水對淋巴細胞進行分離處理；將分離得到的細胞用配置的培養液進行重懸，轉移至預處理后的培養瓶中，并在培養瓶中加入干擾素?γ，將培養瓶置于恒溫培養箱中培養；基于設定時長和/或細胞生長情況，向培養瓶中補加新配置的所述培養液并加入白細胞介素?2和白細胞介素?23進行培養；培養預設天數后，收集增殖的TIL細胞。從而，利用CD3和RN聯合IL?2和IL?23擴增培養，增強了TIL細胞的增殖能力，同時，促進TIL細胞對腫瘤細胞的殺傷活性，顯著提高腹水來源體外TIL細胞增殖的效率及其靶向殺傷腫瘤細胞的活性。

技術領域

本說明書涉及細胞培養領域，尤其涉及一種TIL細胞的制備方法、試劑盒和試劑套裝。

背景技術

世界癌癥報告估計，2012年中國癌癥發病人數為306.5萬，約占全球發病的五分之一；癌癥死亡人數為220.5萬，約占全球癌癥死亡人數的四分之一。我國腫瘤發病率多年持續上升，已成為一個必須高度重視的公共衛生問題乃至社會問題，中國亟須向腫瘤宣戰。

當前我國癌癥發病率、死亡率呈持續增長趨勢。更為嚴峻的是，這種勢頭并未得到有效的遏制。國家癌癥中心腫瘤流行病學研究員代敏介紹，今后20年，我國癌癥的發病數和死亡數還將持續上升：根據國際癌癥研究署預測，如不采取有效措施，我國癌癥發病數和死亡數到2020年將上升至400萬人和300萬人；2030年將上升至500萬人和350萬人。

我國癌癥發病率接近世界水平，但死亡率高于世界水平。歐美白種人最常見的是前列腺癌和乳腺癌等生存率超過80％以上的癌癥，而我們國家常見的是肺癌、肝癌、消化道癌癥這些生存率不到30％的癌癥。第三次全國居民死亡原因調查結果顯示，我國城鄉居民的腫瘤死亡構成正在發生變化，與環境、生活方式有關的肺癌、肝癌、結直腸癌、乳腺癌、膀胱癌死亡率呈明顯上升趨勢。國家癌癥中心發布的《2012中國腫瘤登記年報》顯示，全國腫瘤登記地區惡性腫瘤發病第一位的是肺癌，其次為胃癌、結直腸癌、肝癌和食管癌；死亡第一位的是肺癌，其次為肝癌、胃癌、食管癌和結直腸癌。

腫瘤的治療方法除了手術、放療、化療和靶向治療以外，還有一種原理獨特的方法－腫瘤免疫治療。手術、放療和化療能在短時間內有效減輕腫瘤負荷，但因其不能有效清除腫瘤細胞，手術后微小殘存病灶、對化療產生耐藥及對放療不敏感的患者腫瘤易發生轉移，且副作用大等弊端，使得腫瘤的臨床療效低。腫瘤免疫治療主要通過調控機體免疫系統來實現抗腫瘤作用，能系統殺滅腫瘤細胞，有效抑制腫瘤細胞的轉移、擴散和復發，副反應小等良好的臨床治療效果。早在19世紀就有對免疫與腫瘤關系的研究和治療嘗試，然而直到近5年，腫瘤免疫治療才得以正名，其確實能夠提高腫瘤患者的生存期，從而有了“神藥”的稱號。腫瘤免疫治療已登上癌癥治療的歷史舞臺，并逐漸大放異彩。腫瘤免疫治療的實質，是借助現代科技手段，助力人體已有的進化了的免疫系統去對抗癌癥，從而在體內可以激活對腫瘤細胞的防御。

目前，腫瘤細胞免疫治療應用于臨床的細胞有DC細胞、CIK細胞、CTL細胞、TIL細胞、CAR-T細胞等，其中TIL細胞是一種新型的抗腫瘤效應細胞，而TIL細胞免疫療法屬于一種新型細胞免疫療法，具有高效、特異、副作用小等優點。由于TIL細胞是浸潤在腫瘤中的T細胞，對腫瘤有天然的識別性，而且理論上是識別非特定的多種癌細胞的T細胞組合，故TIL細胞療法理論上在對抗實體瘤異質性方面優于CAR-T/TCR-T。TIL細胞免疫療法從80年代就已經用在患者身上，主要治療黑色素瘤，到目前為止，有效率達56％，包括22％的晚期病人被“臨床治愈”。

TIL細胞療法流程大致為：從患者體內取出癌性腹水，在符合GMP標準的車間進行擴增，數量達到幾十億到上百億個細胞，一次性回輸到患者體內以誘導自身免疫的抗腫瘤作用。然而，傳統TIL細胞療法存在一定的局限性，如TIL細胞大多數是耗竭性T細胞，殺傷功能相對較弱；而且，TIL細胞會被微環境抑制，其大規模擴增也存在技術難點。

發明內容