[發明專利]一種基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法

在審

• 申請號: 202010003867.8
• 申請日: 2020-01-03
• 公開（公告）號: CN111096956A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 譚明乾;鐵珊珊;張雪迪;陳衍男;李政;梁鐸;李佳璇
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: A61K9/52
• 分類號: A61K9/52;A61K31/353;A61K47/36;A61P39/06;A23L33/105;A23P10/30
• 代理公司: 大連格智知識產權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉琦

1.一種基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、配制內相原花青素-羧甲基纖維素鈉溶液：將羧甲基纖維素鈉溶液與原花青素水溶液混合均勻，得內相；所述內相中羧甲基纖維素鈉的終濃度是9～11mg/mL，所述原花青素的終濃度是4～6mg/mL；

S2、配制中間相海藻酸鈉-乙二胺四乙酸二鈉鈣溶液：將海藻酸鈉溶液與乙二胺四乙酸二鈉鈣溶液混合均勻，得中間相；所述中間相中海藻酸鈉的終濃度與步驟S1所述內相中羧甲基纖維素鈉的終濃度相等，所述乙二胺四乙酸二鈉鈣的終濃度為9～11mg/mL；

S3、配制外相棕櫚油：在棕櫚油中加入吐溫80和醋酸，在功率100～200W條件下超聲25～35min，得外相；其中，所述棕櫚油和所述吐溫80的體積比是100:1～3，所述棕櫚油和所述醋酸的體積比是100:1～3；

S4、配制收集液：將氯化鈣溶液與含有醋酸的殼聚糖水溶液混合均勻，得收集液；所述收集液中氯化鈣的終濃度為4～6mg/mL，所述殼聚糖的終濃度為4～6mg/mL；所述含有醋酸的殼聚糖水溶液中，醋酸和水的重量比為(0.5～1.5):100；

S5、采用微流控技術制備樣品：將步驟S1所述內相、步驟S2所述中間相和步驟S3所述外相通過注射泵注射到微流控裝置的芯片內，將所述芯片放置在含有收集液的收集槽內；所述注射泵流速為：內相流速100～120μL/h，中間相流速100～120μL/h，外相流速3550～3650μL/h；反應結束后，將所述收集液離心，去除上層油相，所得溶液是活性因子載運體系；其中，所述內相、中間相、外相和收集液的體積比是1:1:30:(18～48)。

2.根據權利要求1所述基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法，其特征在于，步驟S1所述羧甲基纖維素鈉溶液的制備方法為：取羧甲基纖維素鈉加入水中，600～1000rpm攪拌6～12h，配制成羧甲基纖維素鈉溶液。

3.根據權利要求1所述基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法，其特征在于，步驟S1所述原花青素水溶液的制備方法為：取原花青素加入水中，在功率100～200W超聲5～10min，配制成原花青素水溶液。

4.根據權利要求1所述基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法，其特征在于，步驟S2所述海藻酸鈉溶液的制備方法為：取海藻酸鈉加入水中，600～1200rpm攪拌6～12h，配制成海藻酸鈉水溶液。

5.根據權利要求1所述基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法，其特征在于，步驟S2所述乙二胺四乙酸二鈉鈣溶液的制備方法為：取乙二胺四乙酸二鈉鈣加入水中，在功率100～200W超聲5～10min，配制成乙二胺四乙酸二鈉鈣溶液。

6.根據權利要求1所述基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法，其特征在于，步驟S4所述氯化鈣溶液的制備方法為：取氯化鈣加入水中，在功率100～200W超聲5～10min，配制成氯化鈣溶液。

7.根據權利要求1所述基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法，其特征在于，步驟S4所述含有醋酸的殼聚糖水溶液的制備方法為：取殼聚糖加入含有醋酸的水溶液中，600～1000rpm攪拌6～12h，配制成含有醋酸的殼聚糖水溶液；其中，所述含有醋酸的水溶液中，醋酸和水的體積比是(0.5～1.5):100。

8.根據權利要求1所述基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法，其特征在于，步驟S5所述離心的參數為：轉速3000rpm，時間10min。

9.根據權利要求1所述基于陰離子海藻酸鈉的pH響應腸靶向活性因子載運體系的制備方法，其特征在于，包括步驟：

S1、配制內相原花青素-羧甲基纖維素鈉溶液：

取羧甲基纖維素鈉加入水中，600rpm攪拌6h，配制成濃度為20mg/mL的羧甲基纖維素鈉溶液；

取原花青素加入水中，在功率100W超聲10min，配制成濃度為10mg/mL原花青素水溶液；

將濃度為20mg/mL的羧甲基纖維素鈉溶液與濃度為10mg/mL的原花青素水溶液按體積比1:1混合均勻，得內相；

S2、配制中間相海藻酸鈉-乙二胺四乙酸二鈉鈣溶液：

取海藻酸鈉加入水中，1000rpm攪拌12h，配制成濃度為20mg/mL的海藻酸鈉水溶液；

取乙二胺四乙酸二鈉鈣加入水中，在功率100W條件下超聲10min，配制成濃度為20mg/mL的乙二胺四乙酸二鈉鈣溶液；

將濃度為20mg/mL的海藻酸鈉溶液與濃度為20mg/mL的乙二胺四乙酸二鈉鈣溶液按照體積比為1:1混合均勻，得中間相；

S3、配制外相棕櫚油：

在棕櫚油中加入吐溫80和醋酸，在功率100W超聲30min，得外相；所述棕櫚油和所述吐溫80的體積比為100:2；所述棕櫚油和所述醋酸的體積比為100:2；

S4、配制收集液：

取氯化鈣加入水中，在功率100W超聲10min，配制成濃度為10mg/mL的氯化鈣溶液；

取殼聚糖加入含有醋酸的水溶液中，600rpm攪拌6h，配制成含有醋酸的殼聚糖水溶液；其中，所述醋酸和水的體積比是1:100，所述殼聚糖的濃度為10mg/mL；

將濃度為10mg/mL的氯化鈣溶液與含有醋酸的殼聚糖水溶液按照體積比1:1混合均勻，得收集液；

S5、采用微流控技術制備樣品：將步驟S1所述內相0.1mL、步驟S2所述中間相0.1mL和步驟S3所述外相3mL通過注射泵注射到微流控裝置的芯片內，將所述芯片放置在含有1.8mL收集液的收集槽內；所述注射泵流速為：內相流速120μL/h，中間相流速120μL/h，外相流速3600μL/h；反應結束后，將所述收集液3000rpm離心10min，去除上層油相，所得溶液是活性因子載運體系。