[發(fā)明專利]一種熊去氧膽酸的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010003134.4
• 申請(qǐng)日: 2020-01-02
• 公開（公告）號(hào): CN113061637A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張翔;董強(qiáng);黃清東;袁偉;向世明;鄧治榮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川百特芳華醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P33/02
• 分類號(hào): C12P33/02;C12P33/06
• 代理公司: 成都弘毅天承知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51230
• 代理人: 沈穎

1.一種熊去氧膽酸的制備方法，其特征在于，包括以下制備步驟：

(1)膽酸在7α-羥基類固醇脫氫酶、12α-羥基類固醇脫氫酶、輔酶、輔酶再生體系、水溶液的作用下發(fā)生氧化反應(yīng)得到7,12酮基-石膽酸；

(2)7,12酮基-石膽酸在7β-羥基類固醇脫氫酶、輔酶、輔酶再生體系的作用下發(fā)生還原反應(yīng)得到12酮基-熊去氧膽酸；

(3)12酮基-熊去氧膽酸脫12位羰基得到熊去氧膽酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熊去氧膽酸的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，7α-羥基類固醇脫氫酶和12α-羥基類固醇脫氫酶同時(shí)添加，或先后添加催化反應(yīng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熊去氧膽酸的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，輔酶為NAD或NADP，輔酶再生體系為核黃素還原酶/氧氣體系或醇脫氫酶/丙酮體系或乳酸脫氫酶/丙酮酸體系。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種熊去氧膽酸的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)具體為：配置7α-羥基類固醇脫氫酶、12α-羥基類固醇脫氫酶、NAD輔酶、核黃素以及核黃素還原酶的混合溶液，然后與膽酸水溶液混合溶解，控制pH在7.5～9.0，通入空氣或氧氣氧化反應(yīng)，得到7,12酮基-石膽酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種熊去氧膽酸的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，各原料在所形成的混合溶液中的濃度為：膽酸濃度為10～100g/L，7α-羥基類固醇脫氫酶酶活2～200U/ml，12α-羥基類固醇脫氫酶酶活2～200U/ml，NAD輔酶濃度為0.005～0.1g/L，核黃素濃度為0.05～1g/L，核黃素還原酶酶活2～200U/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熊去氧膽酸的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，輔酶為NAD或NADP，輔酶再生體系為葡萄糖脫氫酶/葡萄糖體系。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種熊去氧膽酸的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)具體為：配置7β-羥基類固醇脫氫酶，葡萄糖脫氫酶，NADP輔酶，葡萄糖的混合溶液，然后與7,12酮基-石膽酸水溶液混合，控制pH在6.5～7.8，還原得到12酮基-熊去氧膽酸。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種熊去氧膽酸的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，各原料在所形成的混合溶液中的濃度為：7β-羥基類固醇脫氫酶酶活1～200U/ml，葡萄糖脫氫酶酶活0.7～200U/ml，NADP輔酶濃度為0.005～0.1g/L，葡萄糖摩爾濃度為12酮基-熊去氧膽酸摩爾濃度為1～3倍，7,12酮基-石膽酸水溶液濃度為10～100g/L。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熊去氧膽酸的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)具體為：將12酮基-熊去氧膽酸與乙二醇或三乙二醇、氫氧化鈉或氫氧化鉀、水合肼混合，加熱反應(yīng)得到熊去氧膽酸。