[發明專利]抗MCV抗體定量檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 202010002462.2
• 申請日: 2020-01-02
• 公開（公告）號: CN111077321B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 肖文峰
• 申請（專利權）人: 北京森美希克瑪生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/545
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王闖

1.一種抗MCV抗體定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括：分別制備包被板、酶標液、系列校準品、質控品、樣本稀釋用緩沖液、底物液和洗滌液；其中，

制備包被板的步驟包括：將含有突變型瓜氨酸波形蛋白的包被液加入微孔板條的微孔中進行包被，之后棄去孔內液體，將封閉液加入微孔板條的微孔中進行封閉，之后棄去孔內液體，對微孔板條進行干燥；

制備酶標液的步驟包括：將酶標物和酶聯抗體進行偶聯；其中，所述酶聯抗體為采用抗MCV抗體作為抗原對機體進行免疫后獲得的抗體；

制備系列校準品的步驟包括：在校準品基質液中分別加入不同濃度的抗MCV抗體，得到不同濃度的校準品，其中，所述校準品基質液為含有8wt%~12wt%體檢健康人血清的緩沖液；以緩沖液作為零點校準品；所述零點校準品選用的緩沖液與所述校準品基質液中的緩沖液相同；

制備質控品的步驟包括：在質控品基質液中加入已知濃度的抗MCV抗體，其中，所述質控品基質液為體檢健康人血清；

制備底物液的步驟包括：在緩沖液中加入所述酶標物的反應底物；

制備樣本稀釋用緩沖液的步驟包括：在緩沖液中加入表面活性劑，混合均勻；

制備洗滌液的步驟包括：在緩沖液中加入鹽與表面活性劑，混合均勻；

制備酶標液的步驟中：

將酶標物和酶聯抗體進行偶聯后，用緩沖液將酶標物和酶聯抗體的偶聯產物稀釋至工作濃度；

將偶聯產物稀釋至工作濃度用的緩沖液為含有0.5wt%~1.5wt%表面活性劑的Tris緩沖液或磷酸鹽緩沖液；所述Tris緩沖液的濃度為0.03mol/L~0.07mol/L，pH為9.3~12.3，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.03mol/L~0.07mol/L，pH為6.9~7.9；

所述酶標物包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶和吖啶酯中的至少一種；

所述酶聯抗體為采用抗MCV抗體作為抗原對機體進行免疫后獲得的IgG類抗體。

2.如權利要求1所述的抗MCV抗體定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，制備包被板的步驟中：

所述包被液為含有0.5wt%~1.5wt%突變型瓜氨酸波形蛋白的碳酸鹽緩沖液，所述碳酸鹽緩沖液的濃度為0.03mol/L~0.07mol/L，pH為8.8~11.8；

所述封閉液為含有0.8wt%~1.2wt%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.03mol/L~0.07mol/L，pH為6.9~7.9；

將包被液加入微孔板條中進行包被的條件為：2℃～8℃，包被16小時～24小時；將封閉液加入微孔板條中進行封閉的條件為：34℃～40℃，封閉1.5小時～2小時。

3.如權利要求1所述的抗MCV抗體定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，制備包被板的步驟中：

對微孔板條進行干燥的方式為：將微孔板條置于干燥箱中35℃~40℃干燥1.5小時～2小時；

所述微孔板條的材質為聚苯乙烯。

4.如權利要求1所述的抗MCV抗體定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述包被板上包被的突變型瓜氨酸波形蛋白為人源性突變型瓜氨酸波形蛋白；

所述酶聯抗體為采用人源性抗MCV抗體作為抗原對機體進行免疫后獲得的抗體；

所述酶聯抗體包括羊抗人抗體、兔抗人抗體和鼠抗人抗體中的至少一種。

5.如權利要求1所述的抗MCV抗體定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，制備系列校準品的步驟中：

所述緩沖液為Tris緩沖液，所述Tris緩沖液的濃度為0.03mol/L~0.07mol/L，pH為9.3~12.3。

6.如權利要求5所述的抗MCV抗體定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，

所述系列校準品包括抗MCV抗體濃度分別為0U/mL、20U/mL、40U/mL、100U/mL、300U/mL、1000U/mL的校準品。