[發(fā)明專(zhuān)利]現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)扇貝閉殼肌糖原含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010000268.0
• 申請(qǐng)日: 2020-01-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111044513A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋林生;劉超;于子超;王玲玲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 大連海洋大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/78
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/78
• 代理公司: 大連非凡專(zhuān)利事務(wù)所 21220
• 代理人: 閃紅霞

本發(fā)明公開(kāi)一種現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)扇貝閉殼肌糖原含量的方法，可在現(xiàn)場(chǎng)（養(yǎng)殖海區(qū)、近岸、食品加工車(chē)間及其他非實(shí)驗(yàn)室場(chǎng)合）通過(guò)堿液提取糖原、碘液顯色、比色卡比對(duì)等簡(jiǎn)單操作，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)扇貝閉殼肌食品糖原含量的測(cè)定。不需要將樣品運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，也無(wú)需使用酶標(biāo)儀、分光光度計(jì)等精密儀器，操作簡(jiǎn)單方便，可實(shí)現(xiàn)對(duì)閉殼肌糖原含量的快速檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種扇貝閉殼肌糖原含量的檢測(cè)方法，尤其是一種操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)扇貝閉殼肌糖原含量的方法。

背景技術(shù)

扇貝是我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)貝類(lèi)之一，其中閉殼肌是人們餐桌上的重要美食，亦是扇貝食品加工的主要原材料。然而扇貝離水死亡后，閉殼肌中糖原會(huì)在糖原酵解酶系的作用下降解為果糖-6-磷酸，從而影響閉殼肌的鮮度，甚至引起腐臭變質(zhì)。因此，糖原含量是確定扇貝閉殼肌新鮮程度的重要指標(biāo)。

目前，糖原含量的檢測(cè)方法主要包括比色法（蒽銅比色法、鄰甲苯胺比色法、碘鹽顯色法等）、熒光測(cè)定法（熒光間接測(cè)定法、2-NBDG 熒光直接測(cè)定法等）以及免疫組化法等。然而，上述糖原含量檢測(cè)方法的均需要將扇貝閉殼肌樣品從現(xiàn)場(chǎng)（養(yǎng)殖海區(qū)、近岸、食品加工車(chē)間及其他非實(shí)驗(yàn)室場(chǎng)合）運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)定，運(yùn)輸過(guò)程中的糖原損耗可導(dǎo)致糖原含量的檢測(cè)值與現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際值不相一致。現(xiàn)有檢測(cè)方法在測(cè)定過(guò)程中需要分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀等多種精密儀器設(shè)備，操作過(guò)程比較繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述技術(shù)問(wèn)題，提供一種操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)扇貝閉殼肌糖原含量的方法。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)扇貝閉殼肌糖原含量的方法，其特征在于按照如下步驟進(jìn)行：

a. 取扇貝閉殼肌與質(zhì)量百分比濃度30%的氫氧化鉀溶液按照1g：3 mL混合后加熱30min，獲得閉殼肌裂解液；

b. 將閉殼肌裂解液與超純水按照體積比1：19的混合，獲得糖原檢測(cè)液；

c. 將糖原檢測(cè)液與糖原顯色液按照體積比2.3：2.6混合均勻，靜置20 min；所述糖原顯色液是將糖原顯色液A和糖原顯色液B按照體積比1.3：100的混合液，所述糖原顯色液A是0.026 g/mL碘和0.26 g/mL碘化鉀的混合溶液，所述糖原顯色液B是飽和氯化鈣溶液；

d. 將糖原檢測(cè)液的顯色與比色卡進(jìn)行比對(duì)，將比對(duì)獲得的數(shù)值除以所取扇貝閉殼肌重量，即獲得扇貝閉殼肌中糖原含量；所述比色卡是預(yù)先使用牡蠣糖原配制各濃度梯度糖原溶液，使用同批次試劑進(jìn)行碘液顯色反應(yīng)，按照顯色深度和糖原含量的對(duì)應(yīng)關(guān)系制作而成，比色卡顯色范圍對(duì)應(yīng)的糖原含量為10~40mg/mL，糖原含量梯度為2mg/mL。

本發(fā)明可在現(xiàn)場(chǎng)（養(yǎng)殖海區(qū)、近岸、食品加工車(chē)間及其他非實(shí)驗(yàn)室場(chǎng)合）通過(guò)堿液提取糖原、碘液顯色、比色卡比對(duì)等簡(jiǎn)單操作，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)扇貝閉殼肌食品糖原含量的測(cè)定。不需要將樣品運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，也無(wú)需使用酶標(biāo)儀、分光光度計(jì)等精密儀器，操作簡(jiǎn)單方便，可實(shí)現(xiàn)對(duì)閉殼肌糖原含量的快速檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例所用比色卡。

具體實(shí)施方式

取3枚死亡蝦夷扇貝為樣品，分別按照如下步驟進(jìn)行：

a. 準(zhǔn)確稱(chēng)取1g閉殼肌置于透明玻璃試管中，向試管中加入3 mL質(zhì)量比濃度為30%的氫氧化鉀溶液，將試管置于自熱包上加熱30min，流水冷卻后，獲得閉殼肌裂解液；

b. 取1 mL閉殼肌裂解液置于新的透明試管中，滴加19 mL超純水，充分混合均勻，獲得糖原檢測(cè)液；