[發明專利]一種雞法氏囊病精制卵黃抗體泡騰片的制備方法

在審

• 申請號: 202010000132.X
• 申請日: 2020-01-01
• 公開（公告）號: CN111000998A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 安同偉;陳慶忠;李迎梅
• 申請（專利權）人: 天津赫萊恩特生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/42
• 分類號: A61K39/42;A61K9/20;A61P31/14;C07K16/10;C07K16/02;C07K1/34;C12N1/20;C12R1/01;C12R1/125
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1.一種雞法氏囊病精制卵黃抗體泡騰片的制備方法，其特征在于：該制備方法的步驟如下：

(1)取未經免疫的23周齡健康產蛋雞，對其進行雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗3次免疫注射，免疫間隔為10天，用量1ml/只/次，檢測血清抗體效價至1:256時收集高免蛋；

(2)清洗消毒步驟(1)中所得高免蛋，收集并攪拌得卵黃勻漿；

(3)對步驟(2)中所得卵黃勻漿中添加1.5倍體積的生理鹽水和濃度為0.1％的正辛酸，邊加邊攪拌0.5～1.5小時，室溫放置2～6小時后，以4200～5500r/min的轉速離心30min，丟棄沉淀，在上清液中加入1.2％硫酸酯葡聚糖，攪拌10-20分鐘，用孔徑5μm和1μm的筒式濾芯過濾上清液，再經截留分子量為10kD的中空纖維超濾柱進行濃縮3～4倍后再用NaOH調整PH值為6.8～7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式濾芯過濾除菌，得抗體效價1:128的濾液。

(4)制備益生菌液：取雙歧桿菌和枯草芽孢桿菌分別進行培養，再將兩種菌液混合，得到益生菌液；

(5)將步驟(3)所述濾液與步驟(4)得到的益生菌液在無菌條件下按體積比1:1混合均勻，再按體積比1:1添加凍干保護劑混合均勻，冷凍真空干燥處理，得到凍干粉；

(6)將步驟(5)得到的凍干粉與泡騰材料混合均勻，壓片，分裝，得到雞傳染性法氏囊病卵黃抗體復合泡騰片。

2.根據權利要求1所述的一種雞法氏囊病精制卵黃抗體泡騰片的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的消毒高免蛋和收集卵黃的方法為：取步驟1)所得高免蛋，用清水沖洗干凈后浸入0.1％新潔爾滅水溶液中消毒15分鐘，取出晾干，再用環氧乙烷氣霧消毒30分鐘后，送入蛋清蛋黃分離機分離得到卵黃，攪拌得到卵黃勻漿。

3.根據權利要求1所述的一種雞法氏囊病精制卵黃抗體泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟(4)中長雙歧桿菌和枯草芽孢桿菌分別按照以下步驟進行培養：將MRS液體培養基預熱至37℃，同時按1％接種量接種長雙歧桿菌液，37℃靜置培養18～20小時，收獲菌液至2-8℃保存備用；將芽孢桿菌培養基預熱至37℃，同時按2％接種量接種枯草芽孢桿菌種子液，37℃靜置培養16～20小時，收獲菌液至2-8℃保存備用。

4.根據權利要求1所述的一種雞法氏囊病精制卵黃抗體泡騰片的制備方法，其特征在于步驟(5)中所述的凍干保護劑為每1000ml磷酸緩沖液中含有10-30g黃芪多糖和5-20g蒲公英黃酮。

5.根據權利要求1所述的一種雞法氏囊病精制卵黃抗體泡騰片的制備方法，其特征在于步驟(6)中所述的泡騰材料的制備方法：

按重量份數分別稱取檸檬酸22份、蔗糖15份、碳酸氫鈉35份、羧甲基淀粉鈉10份，甜橙粉末1份、10％PVP無水乙醇4份、PEG60001份，硬脂酸鎂0.5份，將上述成分充分混合，40～65℃烘干后過6～10目篩，制得顆粒備用，加入L-亮氨酸，經Co-60輻射滅菌制得泡騰材料。