[發(fā)明專利]作為阿爾茨海默病的診斷和預后中的標志物的p53肽

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201980093527.4
• 申請日: 2019-03-06
• 公開（公告）號: CN113574387A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丹妮拉·萊蒂齊婭·烏貝蒂;毛里齊奧·梅莫
• 申請（專利權(quán)）人: 戴爾戴莫有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C07K14/47
• 代理公司: 北京安信方達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 王瑋瑋;鄭霞

公開了p53肽及它們在生物樣品中作為阿爾茨海默病(AD)的診斷和/或預后中的生物標志物的用途。本發(fā)明還提供了一種診斷方法，所述診斷方法基于高度精確的質(zhì)譜分析，通過特異性地定量患者的人類血漿中的所述p53肽的水平，用于對處于疾病的臨床前期和前驅(qū)期的阿爾茨海默病的診斷，以及用于對受試者中的認知衰退的預后。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及p53肽P1、P2、P3和P5，以及它們在生物樣品中作為阿爾茨海默病(AD)的診斷和/或預后中的生物標志物的用途。本發(fā)明還提供了一種診斷方法，所述診斷方法基于高度精確的質(zhì)譜分析，通過特異性地定量患者的人類血漿中的所述p53肽的水平，用于對處于阿爾茨海默病的臨床前期和前驅(qū)期的該疾病的診斷，以及用于對受試者中的認知衰退的預后。

背景技術(shù)

在不同的已發(fā)表研究[1-3]中已經(jīng)展示了將大量的改變構(gòu)象的p53異形體(isoform)的存在確認為阿爾茨海默病(簡稱“AD”)的早期風險因素。最初，AD、輕度認知障礙、帕金森病、其他癡呆和健康受試者中的多于400名受試者被登記到不同的獨立研究中，并通過用使用商業(yè)構(gòu)象特異性抗p53抗體的不同技術(shù)(免疫沉淀實驗、FACS分析、ELISA)對未折疊的p53進行測試[4-7]。2006年Uberti等人[8]首次展示了來自散發(fā)性阿爾茨海默病(AD)患者的成纖維細胞特異性表達異常且可檢測到的p53構(gòu)象狀態(tài)，該構(gòu)象狀態(tài)將這些細胞與年齡匹配的非AD受試者的成纖維細胞區(qū)分開來。在這種構(gòu)象改變的狀態(tài)中，p53失去其反式激活其靶基因的能力，并且因此失去了其生物學功能[9-10]。與健康非癡呆受試者或受其他癡呆和PD影響的患者相比，在AD的血液中以及轉(zhuǎn)化為AD的MCI中也證實了較高量的未折疊的p53。

總之，這些數(shù)據(jù)表明了未折疊的p53和AD病理之間的直接聯(lián)系。

在EP3201234B1中，已經(jīng)報道了一種命名為2D3A8的新的構(gòu)象特異性抗Up53抗體的開發(fā)，該抗體與表位(aa 282-297)結(jié)合，該表位僅在p53失去其野生型構(gòu)象趨向未折疊的表型時才可及(accessible)。與起初在AD中發(fā)現(xiàn)未折疊的p53時使用的商業(yè)抗體(PAb240，aa214-217)相比，2D3A8抗體在Oviedo隊列(cohort)中在與健康老年人相比鑒定AD患者中顯示出高的靈敏度和特異性。

特別地，所述免疫診斷方法能夠鑒定生物樣品中指示AD的免疫復合物，并確定受輕度認知障礙(MCI)影響的受試者發(fā)展AD的易感性。

現(xiàn)在需要鑒定可用于阿爾茨海默病的診斷和/或預后的新的特異性生物標志物，并且需要開發(fā)可用于AD(特別是處于該疾病的臨床前期和前驅(qū)期)的診斷和/或預后以及用于對AD與其他形式的癡呆的鑒別分析的精確且合理的診斷方法。

發(fā)明概述

通過在生物樣品中鑒定具有權(quán)利要求書中報告的序列的稱為P1(SEQ ID N.1)、P2(SEQ ID N.2)、P3(SEQ ID N.3)和P5(SEQ ID N.5)的四種p53肽，實現(xiàn)了該目的。

本發(fā)明的另一方面涉及一種診斷方法，所述診斷方法基于所述肽的鑒定和定量，用于在處于不同期的阿爾茨海默病的診斷和/或預后中使用。

本發(fā)明的特征和優(yōu)點將從以下的詳細描述和為說明性目的提供的工作實施例中變得明顯。

發(fā)明詳述

因此，本發(fā)明涉及用于對處于疾病的臨床前期和前驅(qū)期的阿爾茨海默病的診斷的高度精確質(zhì)譜方法。所述方法基于特異性p53肽的鑒定和水平的定量，所述特異性p53肽簡稱為“P1”、“P2”、“P3”和“P5”或“p53肽”，已經(jīng)通過質(zhì)譜分析在受阿爾茨海默病影響的患者或具有可能傾向于發(fā)展AD的癥狀的患者的人類血漿中檢測到。

特別地，質(zhì)譜分析是在關(guān)于p53的這些特定序列和AD之間的確切相關(guān)性的信息未知時進行的定性和定量的方法。