[發明專利]采用拉曼光譜確定病毒滴度的方法

在審

• 申請號: 201980092894.2
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN113490843A
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: J·丘奇韋爾;M·O·巴拉迪茲;D·馬歇爾
• 申請（專利權）人: 細胞治療彈射器有限公司
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產權代理有限公司 11205
• 代理人: 李艷;臧建明

1.一種采用拉曼光譜定量樣本中的病毒滴度的方法，該方法包括以下步驟：

(a)提供樣本并用光源照射所述樣本；

(b)測量多個波數范圍中的每一個波數范圍內的拉曼散射光的總強度，以獲得所述樣本的波數強度數據集，其中所述多個波數范圍是預先選擇的并且表征樣本中的病毒；

(c)對波數強度數據執行數學數據處理步驟；和

(d)基于所述數學數據處理步驟的輸出定量所述病毒滴度。

2.根據權利要求1所述的方法，其中執行所述數學數據處理和定量所述病毒滴度的步驟包括：

(i)任選地，通過采用一種或多種預處理分析方法對信號強度數據預處理來使波數信號強度數據歸一化，所述預處理分析方法例如一階導數法、二階導數法、標準正態變量(SNV)法、多項式擬合法、多元多項式擬合法、軟化子法、分段多項式擬合(PPF)法或自適應迭代重加權懲罰最小二乘(airPLS)法；

(ii)通過對所述波數信號強度數據應用多元回歸算法來獲得模型參數，所述多元回歸算法諸如偏最小二乘(PLS)回歸算法，任選地其中PLS算法是非線性迭代偏最小二乘(NIPALS)回歸算法或神經網絡；和

(iii)采用通過將所述多元回歸算法應用于所述信號強度數據獲得的模型參數來定量所述病毒滴度。

3.根據權利要求1或權利要求2所述的方法，其中用于照射所述樣本的所述光源是激光并且用波長為785nm的光照射所述樣本。

4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中使用電荷耦合器件(CCD)檢測所述拉曼散射光。

5.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍1至28中的5個或更多個，并且其中變量重要性投影(VIP)≥1.00；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍1至28中的10個或更多個，并且其中VIP≥1.00；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍1至28中的15個或更多個，并且其中VIP≥1.00；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍1至28中的20個或更多個，并且其中VIP≥1.00；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍1至28中的25個或更多個，并且其中VIP≥1.00；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中列出的波數范圍1至28中的所有28個，并且其中VIP≥1.00。

6.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍29至59中的5個或更多個，并且其中變量重要性投影(VIP)≥1.25；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍29至59中的10個或更多個，并且其中VIP≥1.25；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍29至59中的15個或更多個，并且其中VIP≥1.25；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍29至59中的20個或更多個，并且其中VIP≥1.25；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍29至59中的25個或更多個，并且其中VIP≥1.25；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍29至59中的30個，并且其中VIP≥1.25；或者其中，所測量的拉曼光譜中的所述多個波數范圍包含表1中所列的波數范圍29至59中的所有31個，并且其中VIP≥1.25。