[發明專利]乳糖的酶促己糖胺化

在審

• 申請號: 201980084193.4
• 申請日: 2019-12-09
• 公開（公告）號: CN113423839A
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: K-U·巴爾德尼厄斯;M·布羅伊爾;C·魯費爾;M·溫加滕;R·喬奇;S·澤邁爾;B·尼德茨基;K·施默爾策;M·普爾
• 申請（專利權）人: 巴斯夫歐洲公司
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12P19/18;C12P19/26;C12N9/24
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 左路;林曉紅

1.用于生成乳-N-三糖II和/或乳-N-四糖的方法，所述方法包括步驟：

(i)使葡萄糖胺-惡唑啉和/或乳-N-二糖-惡唑啉與乳糖反應，由根據Carbohydrate-Active-Enzymes(CAZy)數據庫(http://www.cazy.org,2018年11月20日更新)分類的糖苷水解酶家族20(GH20)的酶催化，以獲得乳-N-三糖II和/或乳-N-四糖。

2.如權利要求1所述的方法，其中步驟(i)在水性溶液中進行，所述水性溶液含有至少50g/L乳糖，優選至少100g/L乳糖，尤其優選至少150g/L乳糖，最優選至少190g/L乳糖。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述方法在沒有或基本沒有有機溶劑的條件下進行。

4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述葡萄糖胺-惡唑啉和/或乳-N-二糖-惡唑啉在至少20分鐘、優選至少60分鐘的時期內分別添加到乳糖及所述糖苷水解酶家族20(GH20)的酶。

5.如權利要求1-4中任一項所述的生成乳-N-三糖II的方法，其中所述糖苷水解酶家族20(GH20)的酶是β-N-乙酰己糖胺酶，優選兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)JCM1254的β-N-乙酰己糖胺酶，其具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列(BbhI，GenBank登錄號:AB504521.1)，或與SEQ ID NO:1具有至少70％的氨基酸序列相同性且具有β-N-乙酰己糖胺酶活性的酶，或包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的β-N-乙酰己糖胺酶，或包含與SEQ ID NO:2具有至少70％的氨基酸序列相同性的氨基酸序列的β-N-乙酰己糖胺酶。

6.如權利要求1-4中任一項所述的生成乳-N-四糖的方法，其中所述糖苷水解酶家族20(GH20)的酶是乳-N-二糖苷酶，優選兩歧雙歧桿菌JCM1254的乳-N-二糖苷酶，其具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列(LnbB，GenBank登錄號:EU281545.1)，或與SEQ ID NO:3具有至少70％的氨基酸序列相同性且具有乳-N-二糖苷酶活性的酶，或包含SEQ ID NO:4氨基酸序列的乳-N-二糖苷酶，或包含與SEQ ID NO:4具有至少70％的氨基酸序列相同性的氨基酸序列的乳-N-二糖苷酶。

7.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述方法還包括步驟：

(ii)使所述糖苷水解酶家族20(GH20)的酶失活。

8.如權利要求1-5或7中任一項所述的生成乳-N-三糖II的方法，其中所述方法還包括步驟：

(iii)向步驟(i)的混合物或優選步驟(ii)的混合物加入β-半乳糖苷酶或半乳糖基轉移酶及UDP-半乳糖，并且任選地，進一步加入乳糖以獲得乳-N-四糖或乳-N-新四糖。

9.根據Carbohydrate-Active-Enzymes(CAZy)數據庫(http://www.cazy.org,2018年11月20日更新)分類的糖苷水解酶家族20(GH20)的酶用于從乳糖生產乳-N-三糖II或乳-N-四糖的應用，優選權利要求5所定義的酶用于生產乳-N-三糖II的應用或權利要求6所定義的酶用于生產乳-N-四糖的應用。

10.如權利要求9所述的應用，其中使用葡萄糖胺-惡唑啉和/或乳-N-二糖-惡唑啉作為底物。

11.如權利要求9或10所述的應用，其中所述糖苷水解酶家族20(GH20)的酶用于權利要求1-8中任一項所述的方法。