[發明專利]用于原位核酸數字多路復用的方法

在審

• 申請號: 201980081268.3
• 申請日: 2019-10-31
• 公開（公告）號: CN113166800A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: X-J.馬;E.帕克;S.陳
• 申請（專利權）人: 領先細胞醫療診斷有限公司
• 主分類號: C12Q1/6841
• 分類號: C12Q1/6841
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.一種用于細胞中多個靶核酸的多路復用檢測的方法，其包括：

(A)使包含含有多個靶核酸的細胞的樣品與一組探針接觸，其中所述探針組包含探針亞組，所述探針亞組包含提供對每個靶核酸的獨特標記的多個可檢測標記，其中每個探針亞組包含一個或多個不同的標記，其中不同標記的數目和/或組合對于每個靶核酸是獨特的；以及

(B)檢測與相應靶核酸結合的可檢測標記。

2.如權利要求1所述的方法，其中每個所述探針亞組中的每個探針包含：

(a)一組靶探針，其中所述靶探針組包含一個或多個靶探針亞組，其中每個靶探針亞組包含與靶核酸特異性雜交的多對靶探針；

(b)一組前置擴增子，其中所述前置擴增子組包含一個或多個前置擴增子亞組，其中所述一個或多個前置擴增子亞組包含對所述一個或多個靶探針亞組中的每個靶探針對具有特異性的前置擴增子，其中每個前置擴增子包含用于所述靶探針亞組中的一個的靶探針對的結合位點和用于擴增子的多個結合位點；

(c)一組擴增子，其中所述擴增子組包含對每個前置擴增子亞組具有特異性的一個或多個擴增子亞組，其中每個擴增子亞組包含多個擴增子，其中所述擴增子亞組中的一個的擴增子包含用于所述前置擴增子亞組中的一個的前置擴增子的結合位點和用于標記探針的多個結合位點；以及

(d)一組標記探針，其中所述標記探針組包含一個或多個標記探針亞組，其中每個標記探針亞組對所述擴增子亞組中的一個具有特異性，其中每個標記探針亞組包含多個標記探針，其中每個標記探針亞組中的標記探針包含標記和用于所述擴增子亞組中的一個的擴增子的結合位點，其中每個標記探針亞組中的標記在標記探針亞組之間是可區分的；

其中對靶核酸具有特異性的每個探針亞組中的所述一個或多個標記探針亞組包含對于每個探針亞組不同的至少一個標記或標記組合。

3.如權利要求2所述的方法，其中所述靶探針組、前置擴增子組、擴增子組和標記探針組各自包含兩個或更多個亞組。

4.如權利要求2所述的方法，其中所述靶探針組、前置擴增子組、擴增子組和標記探針組各自包含三個或更多個亞組。

5.如權利要求2所述的方法，其中所述靶探針組、前置擴增子組、擴增子組和標記探針組各自包含四個或更多個亞組。

6.如權利要求3所述的方法，其中用于所述兩個或更多個亞組的靶探針結合位點在所述靶核酸上是混雜的。

7.如權利要求1所述的方法，其中每個所述探針亞組中的每個探針包含：

(a)一組靶探針，其中所述靶探針組包含與靶核酸特異性雜交的多對靶探針；

(b)一組前置擴增子，其中所述前置擴增子組包含多個前置擴增子，其中所述前置擴增子包含用于所述靶探針對的結合位點和用于擴增子的多個結合位點；

(c)一組擴增子，其中所述擴增子組包含多個擴增子，其中所述擴增子包含用于所述前置擴增子的結合位點和用于一個標記探針或兩個或更多個不同標記探針的多個結合位點；以及

(d)一組標記探針，其中所述標記探針組包含一個標記探針或兩個或更多個不同標記探針，其中每個標記探針包含標記和用于所述擴增子的結合位點，其中每個不同標記探針中的標記在所述不同標記探針之間是可區分的；

其中對靶核酸具有特異性的每個探針亞組中的所述擴增子包含用于對于每個探針亞組不同的一個標記或兩個或更多個不同標記的組合的結合位點。

8.如權利要求7所述的方法，其中所述標記探針組包含兩個或更多個不同的標記探針，其中所述擴增子組包含多個不同的擴增子，并且其中在每個不同的擴增子上用于所述兩個或更多個不同的標記探針的所述結合位點在每個不同的擴增子上具有不同的順序。