[發(fā)明專利]用于調節(jié)因子VIII功能的組合物和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201980070273.4
• 申請日: 2019-10-23
• 公開（公告）號: CN113301911A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設計）人: 瓦爾德·R·阿魯達;本·薩梅爾森-瓊斯
• 申請（專利權）人: 費城兒童醫(yī)院
• 主分類號: A61K38/14
• 分類號: A61K38/14;A61K38/16;A61K38/37;A61K38/54;C12N15/63;C07H21/04;A61P7/04;A61P7/08
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 劉明海;寧濤

公開了因子VIII變體及其使用方法。

本申請根據35 U.S.C.§119(e)要求2018年10月23日提交的美國臨時專利申請?zhí)?2/749,182的優(yōu)先權。上述申請通過引用并入本文。

本發(fā)明是在美國國立衛(wèi)生研究院授予的授權號為R01 HL-137335-01A1的政府支持下完成的。政府在本發(fā)明中具有一定的權利。

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)學和血液學領域。更具體地，本發(fā)明提供了新的因子VIII變體和使用其來調節(jié)有需要的患者的凝血級聯(lián)的方法。

背景技術

在整個說明書中引用了數個出版物和專利文件，以描述與本發(fā)明有關的現有技術。這些引用中的每一個都通過全文引用的方式并入本文。

因子VIII(FVIII)中的突變可導致嚴重的出血性疾病，并與A型血友病有關。FVIII缺陷或缺乏FVIII活性導致無法有效形成凝塊。迄今為止，由于費用高昂，全世界只有20％的血友病A患者接受FVIII替代療法的常規(guī)治療。通常，所述FVIII是血漿來源的或重組產生的。基于AAV載體的血友病A的基因療法是有前景的，但由于對所述載體的異常免疫應答而存在安全性限制。已經發(fā)現這種異常的免疫反應是載體劑量依賴性的。而且，無論使用蛋白質還是基因療法，所遞送或表達的FVIII的免疫原性都可能是有問題的。實際上，血友病A患者中有20％至30％會對于所述治療形成抑制物(例如抗FVIII中和抗體)(Peyvandi,等人,N.Engl.J.Med.(2016)374:2054-2064；Walsh,等人,Am.J.Hematol.(2015)90:400-405；Eckhardt,等人,J.Thromb.Haemost.(2015)13:1217-1225；Darby,等人,J.Thromb.Haemost.(2004)2:1047-1054；Donfield,等人,Blood(2007)110:3656-3661；Witmer,等人,Br.J.Haematol.(2011)152:211-216；Hoots,W.K.,Semin.Hematol.(2008)45(2Suppl 1):S42-S49；Guh,等人,Haemophilia(2012)18:268-275；Lindvall,等人,Pediatr.Blood Cancer(2014)61:706-711)。因此，產生增強的FVIII分子將通過降低FVIII生產成本，增加AAV基因療法的安全性和/或降低免疫原性而有益于血友病的治療。因此，顯然需要具有改善的生物學特性的FVIII分子。

發(fā)明內容

根據本發(fā)明，提供了用于在有此需要的患者中調節(jié)凝血的組合物和方法。更具體地，提供了調節(jié)(例如，增加)凝血的因子VIII(FVIII)變體。在一個特定的實施方案中，將所述FVIII變體的B結構域替換為與SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一個特定的實施方案中，將所述FVIII變體的B結構域替換為包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一個特定的實施方案中，所述因子VIII變體在位置560、561、712、713和/或659處包含至少一個突變，任選地具有B結構域替換。在一個特定的實施方案中，所述FVIII變體包含將位置659處的Lys用另一個氨基酸取代。在一個具體的實施方案中，所述在位置659處的Lys被Trp、Arg、Ala、His、Tyr、Asp、Thr、Ser、Val、Phe、Gln、或Cys取代，特別是被Ser、Gln或Cys取代。所述FVIII變體可包含B結構域取代和位置659處的取代。還提供了包含至少一種本發(fā)明的FVIII變體和至少一種藥學上可接受的載體的組合物。還公開了編碼本發(fā)明的FVIII變體的核酸分子及其使用方法。本發(fā)明的另一方面包括表達本文所述的FVIII變體的宿主細胞。還公開了分離和純化所述FVIII變體的方法。