[發明專利]工程化長散在元件(LINE)轉座子及其使用方法

在審

• 申請號: 201980069027.7
• 申請日: 2019-10-21
• 公開（公告）號: CN112912497A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 肖恩·克里斯滕森
• 申請（專利權）人: 德克薩斯州大學系統董事會
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12N15/90
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 柴云峰;張瑩

1.RNA成分，其包含DNA靶向序列，一個或多個蛋白質結合基序(PBM)以及待整合到DNA靶位點中的目標核酸序列，其中所述DNA靶向序列，蛋白質結合基序和目標序列可操作地連接，使得它們能夠與源自親本長散在(LINE)元件蛋白質的蛋白質成分結合并逆轉錄成cDNA，所述cDNA能夠在DNA靶位點整合到DNA中。

2.根據權利要求1所述的RNA成分，其中所述蛋白質成分包含RNA結合結構域、接頭結構域、逆轉錄酶、DNA內切核酸酶中的一個或多個，其中所述一個或多個蛋白質結合基序將所述RNA成分結合至所述蛋白質成分的所述RNA結合結構域、接頭結構域、逆轉錄酶、DNA內切核酸酶或其組合。

3.根據權利要求1或2所述的RNA成分，

其中所述RNA成分包含來自或衍生自親本LINE或SINE骨架的元件，并且所述RNA成分的目標核酸序列與LINE或SINE異源；

其中所述蛋白質成分包含來自或衍生自親本LINE的元件；或

其組合。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的RNA成分，其中所述DNA靶向序列與所述親本LINE或SINE是異源的。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的RNA成分，其中所述目標序列編碼基因、基因的片段或功能性核酸。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的RNA成分，其包含來自或衍生自親本LINE或SINE元件的3'PBM序列。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的RNA成分，其包含CRISPR/Cas示蹤序列、CRISPR/Cas引導序列或其組合。

8.根據權利要求1-7中任一項所述的RNA成分，其包含來自或衍生自親本LINE或SINE元件的5'PBM序列。

9.根據權利要求8所述的RNA成分，其中所述5′PBM包含非功能性IRES序列。

10.根據權利要求1-9中任一項所述的RNA成分，其進一步包含核酶。

11.根據權利要求10所述的RNA成分，其中所述核酶是丁型肝炎病毒樣核酶。

12.根據權利要求2-10中任一項所述的RNA成分，其中所述親本LINE或SINE是限制樣內切核酸酶(RLE)LINE。

13.根據權利要求10所述的RNA成分，其中RLE LINE是R2 LINE。

14.根據權利要求3-13中任一項所述的RNA成分，其中所述RNA成分的親本LINE或SINE骨架與所述蛋白成分的親本LINE骨架是相同的LINE和/或所述SINE源自LINE的祖先或是LINE的祖先。

15.蛋白質成分，其包含DNA結合結構域、RNA結合結構域、逆轉錄酶、接頭結構域和內切核酸酶，其中所述DNA結合結構域、RNA結合結構域、逆轉錄酶、接頭結構域和內切核酸酶可操作地連接，使得它們可以在DNA靶位點與RNA成分和DNA結合，并促進RNA成分逆轉錄成cDNA，和cDNA在DNA靶位點整合到DNA中。

16.根據權利要求15所述的蛋白質成分，其中所述RNA成分包含DNA靶向序列，一個或多個蛋白質結合基序以及待整合到所述DNA靶位點的目標核酸序列。