[發明專利]用于純化C1-INH的方法

在審

• 申請號: 201980068304.2
• 申請日: 2019-10-17
• 公開（公告）號: CN112867729A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: A·科爾尼洛娃;H·N·維爾卡
• 申請（專利權）人: 德國杰特貝林生物制品有限公司
• 主分類號: C07K1/20
• 分類號: C07K1/20;C07K14/81
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 譚瑋

1.使用疏水相互作用色譜法用于純化C1-INH的方法，其包括以下步驟：

(i)在其中C1-INH結合到固定相的第一條件下，將含有溶解在其中的C1-INH的溶液裝載在包含固定相的疏水相互作用色譜柱上，

(ii)應用第二條件，以便借助于流動相洗脫C1-INH。

2.根據權利要求1的方法，其特征在于

-第一條件是流動相包含第一濃度的抗離液鹽，優選硫酸鈉或硫酸銨，最優選硫酸銨，其中C1-INH結合到固定相，和

-第二條件是流動相包含第二濃度的抗離液鹽，優選硫酸鈉或硫酸銨，最優選硫酸銨，其中C1-INH被洗脫。

3.根據權利要求2的方法，其中借助于濃度梯度或借助于梯級洗脫實現從第一濃度到第二濃度的轉變。

4.根據權利要求2或3的方法，其中所述固定相選自以下基質物質中的一種或多種：瓊脂糖，交聯瓊脂糖(以各種商品名出售，諸如)，親水聚合物，例如聚甲基丙烯酸酯，其被諸如以下的疏水配體取代

-直鏈烷基，例如乙基、丁基、辛基，

-分枝的烷基，例如叔丁基

-芳基，例如苯基，或

-環烷基，例如己基

其中固定相優選是被烷基或芳基，優選丁基或苯基取代的基質物質，且更優選被丁基或苯基取代的交聯瓊脂糖，最優選被苯基取代的交聯瓊脂糖。

5.根據權利要求4的方法，其中所述固定相是苯基取代的凝膠，諸如GE醫療的Phenyl6 Fast Flow(低取代)。

6.根據權利要求5的方法，其中使用硫酸銨作為離液鹽，并且所述第一濃度高于在約1.1M至約1.4M的范圍中的濃度X(例如，高于在約155至約180mg/ml硫酸銨的范圍中的濃度X)，優選在約1.2M至約1.3M的范圍中(例如，高于在約160至約174mg/ml硫酸銨的范圍中的濃度X)，并且其中所述第二濃度低于濃度X。

7.根據權利要求4的方法，其中所述固定相是丁基取代的凝膠，諸如GE醫療出售的HiScreen^TM Capto^TM Butyl HP。

8.根據權利要求7的方法，其中使用硫酸銨作為離液鹽，并且所述第一濃度高于在約0.9M至約1.0M的范圍中的濃度X(例如，在約124至約131mg/ml的范圍中的濃度X)，并且其中所述第二濃度低于濃度X。

9.根據權利要求4的方法，其中所述固定相是GE醫療出售的或Capto-Phenyl 或東曹出售的或

10.根據權利要求9的方法，其中使用硫酸銨作為離液鹽，并且所述第一濃度高于在約1.1M至約1.4M的范圍中的濃度X(例如，高于在約155至約180mg/ml硫酸銨的范圍中的濃度X)，優選在約1.2M至約1.3M的范圍中(例如，高于在約160至約174mg/ml硫酸銨的范圍中的濃度X)，并且其中所述第二濃度低于濃度X。

11.根據前述權利要求2至10中任一項的方法，其中使用硫酸銨作為離液鹽，并且所述第一濃度在約1.3M至約1.6M之間，優選在約1.3M至約1.4M之間，最優選約1.32M(即約181mg/ml)。

12.根據前述權利要求中任一項的方法，其中所述C1-INH是重組C1-INH，轉基因C1-INH或從血漿、優選人血漿中衍生的C1-INH。

13.根據前述權利要求中任一項的方法，其中通過涉及用沉淀劑分步沉淀的方法獲得用作起始物料的C1-INH濃縮物。

14.根據權利要求13的方法，其中所述分步沉淀確實涉及C1-INH的沉淀，并且其中所述C1-INH以低于C1-INH的沉淀所需的濃度被溶解在含有所述沉淀劑的溶液中。