[發明專利]用于激活和擴增嵌合抗原受體-修飾的免疫細胞的蛋白L

在審

• 申請號: 201980061485.6
• 申請日: 2019-09-19
• 公開（公告）號: CN112739816A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: M·沃德亞恩科;E·麥克勞德;張新;王文波
• 申請（專利權）人: 富士膠片細胞動力公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 陳曉娜

本文提供了用于激活和擴增T細胞的方法。進一步提供了使用所述T細胞用于治療的方法。

本申請要求于2018年9月19日提交的美國臨時專利申請號62/733,291的權益，該申請的全部內容通過引用并入本文。

背景

1.技術領域

本發明總體上涉及免疫學和醫學領域。更具體地，本發明涉及經改造以表達嵌合抗原受體的免疫細胞的方法和組合物。

2.相關技術描述

過繼性癌癥免疫治療包括傳遞用對腫瘤抗原特異的嵌合抗原受體(CAR)修飾的免疫細胞，所述免疫細胞可以通過體外擴增CAR-修飾的T細胞(CAR-T)來生成。目前，CAR-T細胞在體外使用利用CD3-激活抗體(Ab)的傳統方法來擴增。在此方法中，所有T細胞無論CAR表達與否都被誘導增殖并且不以CAR-特異性的方式。該方法可以導致在CD3-擴增的CAR-T群體中CAR表達和功能的“沉默”。

盡管CAR-T細胞可以在培養中利用分離形式或由飼養細胞表達的CAR-特異性腫瘤抗原選擇性地擴增，但抗原培養僅適用于特定的CAR類型。這種方式是不通用的或不太實用的，特別是對于治療性細胞制備而言。因此，類似于基于CD3激活的pan-T細胞擴增培養，CAR-T細胞治療領域將受益于通用的pan-CAR-特異性體外培養，其中CAR-T細胞可以以CAR-特異性的方式被激活和擴增。

發明內容

在第一個實施方案中，本發明提供了一種體外激活和/或擴增CAR-修飾的免疫細胞的方法，包括獲得CAR-修飾的免疫細胞的起始群體；以及在蛋白L的存在下培養CAR-修飾的免疫細胞的所述群體持續以產生激活的和/或擴增的CAR-修飾的免疫細胞的群體的足夠時間。

在某些方面，蛋白L以0.1-5μg/cm²，諸如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4或2.5μg/cm²的濃度存在。具體地，蛋白L可以以1-5μg/mL，諸如1.5、2、2.5、3、3.5、4或4.5μg/mL的濃度存在。在一些方面，蛋白L被包被在培養表面上。例如，培養表面可以是培養板、培養瓶、微載體、微粒、水凝膠顆粒或培養袋。

在一些方面，培養物不包含抗-CD3抗體和/或抗原-特異性靶細胞。在某些方面，CAR-修飾的免疫細胞是T細胞、NK細胞、樹突狀細胞、和/或巨噬細胞。在具體的方面，T細胞是CD8⁺ T細胞、CD4⁺ T細胞、αβT細胞或γδT細胞。在某些方面，所述方法進一步包括選擇CD8⁺ T細胞。

在某些方面，CAR-修飾的免疫細胞是同種異體的。在其他方面，CAR-修飾的免疫細胞是自體的。在具體的方面，CAR-修飾的免疫細胞來源于多能干細胞(PSC)。在特定的方面，PSC是誘導性多能干細胞(iPSC)。在一些方面，iPSC由血細胞或T細胞重編程。在具體的方面，iPSC經附加體重編程。在一些方面，CAR-修飾的免疫細胞來源于原代外周血單核細胞(PBMC)或原代造血干細胞。在特定的方面，iPSC通過細胞因子定向分化而分化成CD34⁺祖細胞。在具體的方面，iPSC通過正向編程而分化CD34⁺祖細胞。例如，CAR可以包括選自由F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv組成的組的抗原結合結構域。在一些方面，CAR包括CD28共刺激結構域和CD3ζ信號傳導結構域。