[發明專利]治療性納米顆粒及其使用方法

在審

• 申請號: 201980060381.3
• 申請日: 2019-09-17
• 公開（公告）號: CN112702994A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 斯特凡·德斯曼特;雷因·韋貝克;海倫·德維特;伊恩·倫特克
• 申請（專利權）人: 根特大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K31/7105;C07K16/28;A61P37/04;A61P35/00;A61K39/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 高麗娜;張瑩

本發明涉及用于優化細胞內核酸特別是mRNA的遞送的方法和組合物。除了mRNA，該組合物，特別是納米顆粒，可以包括糖脂抗原。還提供了與檢查點抑制劑的組合。本發明的方法和組合物靶向抗原呈遞細胞，并且特別用于免疫治療和疫苗接種目的。

技術領域

本發明涉及優化細胞內核酸，特別是mRNA遞送的方法和組合物。除了mRNA，該組合物，特別是納米顆粒，可以包括糖脂抗原。還提供了與檢查點抑制劑的組合。本發明的方法和組合物靶向抗原呈遞細胞，并且特別用于免疫治療和疫苗接種目的。

背景技術

在由于信使RNA的不穩定性而長期限制其使用的地方，如今有可能在體內成功遞送mRNA^[1]。這得到了該領域的兩個最新突破的有力支持：(i)mRNA分子在納米顆粒中的包裝，旨在改善mRNA的選擇性細胞靶向和胞質傳遞^[2,3]和(ii)mRNA構建體的技術進步，包括摻入修飾的核苷酸，產生更穩定的mRNA，并具有改善的翻譯能力^[4-7]。特別是在疫苗接種領域，mRNA編碼的抗原已成為一種用途廣泛的有前途的平臺^[8]。

在癌癥免疫治療領域，Kranz等人提供了第一個人類證據，即通過將mRNA脂質納米顆粒靶向樹突狀細胞(DC)，可誘導針對所編碼的腫瘤抗原的細胞毒性T細胞(CTL)反應^[2]。他們和其他人證明，除了樹突狀細胞成功表達mRNA外，mRNA疫苗的作用方式還取決于I型干擾素(IFN)的誘導作用^[3,9,10]。更具體地，細胞進入后，mRNA分子會觸發先天性免疫激活途徑，包括內體Toll樣受體(TLR)-7和胞質受體MDA-5和RIG-1，這會導致I型IFN信號傳導和誘導抗病毒免疫。在現有技術中，mRNA疫苗依賴于mRNA的這種固有的自佐劑作用。但是，這些疫苗具有重要的局限性，因為已顯示I型IFN信號傳導就像一把雙刃劍，因為誘發的免疫應答過早地停止了mRNA翻譯，從而降低了抗原的生物利用度^[11,12]。此外，有人提出，I型干擾素取決于與T細胞引發的相對時機，可以對T細胞反應產生正向或負面影響，而I型IFN的預暴露會導致T細胞衰竭和凋亡^[13,14]。此外，高水平的IFNα可以引起從流感樣癥狀到自身免疫性后遺癥甚至危及生命的事件^[15,16]的不良反應。

mRNA構建體的幾種修飾或其他純化步驟(包括通過HPLC去除雙鏈RNA片段)可能會下調mRNA分子的免疫刺激特性，從而導致I型干擾素水平降低。例如，摻入修飾的核苷酸(例如假尿苷(Ψ)、N1-甲基假尿苷(m1Ψ)和5-甲基胞苷(5meC))可改善mRNA的穩定性和翻譯，從而使mRNA表達水平更高，更可持續。由于增加的抗原呈遞被證明對誘導長壽抗體和輔助性T細胞應答(包括形成濾泡T細胞)有益，因此這種增強的mRNA表達在疫苗的開發中具有優勢^[17]。然而，核苷修飾的mRNA在很大程度上失去了其自佐劑性，導致I型干擾素水平降低，并且引起CTL免疫力的能力有限。

先前的研究表明，脂質納米顆粒可以同時包裹核苷修飾的mRNA和單磷酰脂質A(MPLA)，在不強烈誘導I型IFN的情況下，恢復了獲得T細胞數量的能力^[18]。然而，核苷修飾的mRNA和MPLA的這種組合策略對腫瘤生長沒有顯著影響，強調了I型IFN參與多種抗腫瘤機制(例如NK細胞的活化，調節性T細胞的減少)。

在使用納米顆粒的基于肽和蛋白的癌癥疫苗中也已經顯示了佐劑的使用(例如WO2012/088414，WO2016/154544，WO2014/128225，US2011229556)。蛋白或蛋白納米顆粒疫苗的發現僅在一定程度上有用，因為抗原在細胞內的位置、抗原的處理和呈遞與mRNA疫苗完全不同。先前將mRNA與其他佐劑(例如Poly(I:C)和脂多糖)結合的嘗試提出了相容性問題，因為DC成熟會過早地消除細胞攝取機制(例如巨胞飲作用)，并為mRNA翻譯創造不利的環境^[2,19]。仍然需要確定可以與核苷修飾的mRNA疫苗結合使用的適當和安全的免疫刺激劑，以調節其免疫原性，實現強大而持久的CTL反應。