[發(fā)明專利]用于從頭蛋白質(zhì)測(cè)序的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980052998.0
• 申請(qǐng)日: 2019-08-16
• 公開（公告）號(hào): CN112601962A
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: Y·毛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 中國(guó)貿(mào)促會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038
• 代理人: 李程達(dá)

1.一種確定感興趣的多肽的氨基酸序列的方法，所述方法包括：

在允許切割堿性氨基酸后的肽鍵的第一蛋白酶消化所述感興趣的多肽以產(chǎn)生第一組消化的肽片段的條件下，使含有所述感興趣的多肽的第一樣品與所述第一蛋白酶接觸；

對(duì)所述第一組消化的肽片段進(jìn)行片段化以產(chǎn)生與所述第一組消化的肽片段中的肽相對(duì)應(yīng)的第一組片段化的肽離子；

確定所述第一組片段化的肽離子的質(zhì)量；

在允許切割堿性氨基酸之前的肽鍵的第二蛋白酶消化所述感興趣的多肽以產(chǎn)生第二組消化的肽片段的條件下，使含有所述感興趣的多肽的第二樣品與所述第二蛋白酶接觸；

對(duì)所述第二組消化的肽片段進(jìn)行片段化以產(chǎn)生與所述第二組消化的肽片段中的肽相對(duì)應(yīng)的第二組片段化的肽離子；

確定所述第二組片段化的肽離子的質(zhì)量；

從所述第一組片段化的肽離子和所述第二組片段化的肽離子中選擇質(zhì)量相差精氨酸氨基酸殘基的質(zhì)量或賴氨酸氨基酸殘基的質(zhì)量的肽離子對(duì)；

為所述肽離子對(duì)分配離子類型，以生成相同類型的肽離子的列表；

選擇具有遞增了一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的質(zhì)量的遞增質(zhì)量的肽離子質(zhì)量梯以鑒定單獨(dú)氨基酸殘基，并裝配鑒定出的氨基酸殘基以確定所述感興趣的多肽的氨基酸序列。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一蛋白酶是胰蛋白酶。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述第二蛋白酶是Tryp-N蛋白酶。

4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法還包括：

從所述第一組消化的肽片段中選擇第一消化的肽片段；以及從所述第二組消化的肽片段中選擇第二消化的肽片段，所述第二消化的肽片段具有與所述第一消化的肽片段相同的質(zhì)量。

5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法還包括：

從所述第一組消化的肽片段中選擇第一消化的肽片段；以及

從所述第二組消化的肽片段中選擇第二消化的肽片段，所述第二消化的肽片段的質(zhì)量具有的與所述第一消化的肽片段的質(zhì)量差等于賴氨酸氨基酸殘基與精氨酸氨基酸殘基之間的質(zhì)量差。

6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其中對(duì)來自所述第一組消化的肽片段的所述第一消化的肽片段進(jìn)行片段化以產(chǎn)生與所述第一消化的肽片段對(duì)應(yīng)的第一系列片段化的肽離子，并且對(duì)來自所述第二組消化的肽片段的與所述第一消化的肽片段對(duì)應(yīng)的所述第二消化的肽片段進(jìn)行片段化以產(chǎn)生與所述第二消化的肽片段對(duì)應(yīng)的第二系列片段化的肽離子；并且其中分配所述肽離子對(duì)以得出氨基酸序列包括：

為所述肽離子對(duì)分配離子類型，以生成相同類型的肽離子的列表；

選擇具有遞增了一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的質(zhì)量的遞增質(zhì)量的肽離子質(zhì)量梯，以鑒定所述列表中的單獨(dú)氨基酸殘基；以及

以及裝配鑒定出的氨基酸殘基以確定所述感興趣的多肽的氨基酸序列。

7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中從所述第一組片段化的肽離子和所述第二組片段化的肽離子中選擇質(zhì)量相差精氨酸氨基酸殘基質(zhì)量的所述肽離子對(duì)。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中來自所述第一組片段化的肽離子和所述第二組片段化的肽離子的肽離子對(duì)之間的精氨酸氨基酸殘基質(zhì)量負(fù)差指示所述肽具有N末端精氨酸殘基。

9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中來自所述第一組片段化的肽離子和所述第二組片段化的肽離子的肽離子對(duì)之間的精氨酸氨基酸殘基質(zhì)量正差指示所述肽具有C末端精氨酸殘基。

10.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中從所述第一組片段化的肽離子和所述第二組片段化的肽離子中選擇質(zhì)量相差賴氨酸氨基酸殘基質(zhì)量的所述肽離子對(duì)。

11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中來自所述第一組片段化的肽離子和所述第二組片段化的肽離子的肽離子對(duì)之間的賴氨酸氨基酸殘基質(zhì)量負(fù)差指示所述肽具有N末端賴氨酸殘基。