[發明專利]來自源懸浮液的液體培養基的直接接種方法

在審

• 申請號: 201980052246.4
• 申請日: 2019-06-24
• 公開（公告）號: CN112534060A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: T·R·漢森;M·凱樂斯達;M·博伊斯;T·M·威爾斯;C·C·C·余
• 申請（專利權）人: BD科斯特公司;T·R·漢森
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12Q1/24;G01N1/28
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 金德善

制備樣本懸浮液的自動化方法。樣本懸浮液既可用于MALDI，又可用于抗微生物劑敏感性(AST)。制備懸浮液，以及為第一分析(例如，MALDI)去除一部分該懸浮液，留下剩余體積。測量剩余體積的濁度。如果濁度低于第一閾值，則懸浮液不用于第二分析(例如，AST)，并且經受濃縮方案以提高懸浮液的濁度。如果濁度在預定范圍內，則計算將使預定量的樣本遞送到容器用于第二分析的懸浮液的體積。如果懸浮液的濁度高于預定范圍，并且懸浮液未被稀釋預定倍數，則根據稀釋方案對懸浮液進行稀釋。

相關申請的交叉引用

本申請要求2018年6月25日提交的申請序列號為62/689,419的權益，其公開內容通過引用并入本文。

背景技術

本文公開了一種使用單一懸浮液對生物樣本(例如，血液)中的微生物進行鑒定和抗微生物劑敏感性的方法。

作為醫學診斷的常規做法，將生物樣本(如血液)從患者提取并分析。根據指示，可分析樣本，以例如通過血液培養(如來自Becton,Dickinson and Company的BACTEC^TMFX和BACTEC^TM9000系列)或通過劃線到瓊脂板上(手動或通過自動化儀器，如Becton,Dickinsonand Company出售的Innova^TM或Inoqula)來確定樣本中是否存在微生物。如果確定存在微生物，則存在醫學和經濟上的理由以鑒定存在的具體微生物，并為便于治療而鑒定微生物的抗生素抗性/敏感性。

多種微生物(其以下也將被稱為微生物(microbes))(特別是細菌和單細胞真菌)可以通過質譜(“質譜”(“mass spec”))過程(如基質輔助激光解吸離子化(“MALDI”))來鑒定。在MALDI過程中，將來自以通常方式在營養培養基中培養的菌落的少量微生物轉移到稱為MALDI板的質譜樣本支撐板上，以及然后通常通過MALDI飛行時間(TOF)直接進行質譜分析。質譜分析顯示了不同的蛋白質，只要它們以足夠的濃度存在于微生物中。然后，通過含有數千個參考譜的譜庫(spectral libraries)的計算機化搜索，從微生物的蛋白質圖譜確定微生物的身份。由于相關的微生物經常含有許多相同的蛋白質類型，所以如果庫中沒有用于待檢查的微生物的精確物種的參考質譜，則具有較寬松相似度要求的計算機化的庫搜索可以至少提供微生物的目、科或屬的一些指示。MALDI過程在Ulrich Weller的標題為“體液中的病原體的鑒定”的國際公開號WO-2009/065580A1中進一步詳細地描述，其內容通過引用以其整體并入本文。多種質譜儀器可用于鑒定。

期望分析抗微生物劑在抑制來自臨床樣品的微生物分離物生長方面的有效性。這種分析被稱為抗微生物劑敏感性試驗(“AST”)。背景技術的AST技術是稀釋技術，其涉及通過連續兩倍稀釋將細菌暴露于液體培養基中降低濃度的抗微生物劑中。抗微生物劑的最低濃度(其中沒有發生可見細菌生長)被定義為最小抑菌濃度(“MIC”)。MIC是抗微生物劑敏感性的標準量度。既執行鑒定又執行AST的AST儀器(如Becton,Dickinson and Company出售的BD Phoenix^TM系統)是本領域已知的。

背景技術中已知能夠為這種AST過程制備樣品的器械是可從Becton,Dickinsonand Company獲得的BD Phoenix^TMAP。工作流程典型地包括制備接種物，如通過標記適當的管、選擇微生物菌落和在ID液體培養基管中制備濃(重，heavy)懸浮液、以及將管放置在裝有AST液體培養基管的一個或多個架子中(rack)。接下來的工作流程包括執行自動比濁法以將ID管調節到0.5或0.25麥氏單位(“McF”)、向AST液體培養基添加AST指示劑、將部分樣本轉移到AST液體培養基、以及混合兩個管。工作流程接下來包括讓醫護人員去除處理過的ID和AST管、并將它們放置在具有ID/AST板(如Phoenix板)的接種平臺上、以及在板中接種樣品。還參見美國專利申請公開號2008/0072664A1，其內容通過引用以其整體并入本文。