[發明專利]用于進行定量實時PCR的反應混合物、方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201980051441.5
• 申請日: 2019-06-26
• 公開（公告）號: CN112513291A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: S·庫爾默;T·弗蘭克
• 申請（專利權）人: 羅伯特·博世有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 章敏;梅黎

在提供用于進行定量實時PCR的反應批次的反應混合物的情況下，在該反應混合物中包含至少一種至少部分與待定量的DNA片段對應的靶DNA（11），和至少一種具有特定序列和特定量的參比DNA（12），和至少兩種具有不同序列的不同熒光探針，它們在不同波長下生成信號，和引物和脫氧核苷酸和DNA聚合酶。靶DNA（11）和參比DNA（12）具有相同的引物結合位點（13、14）和不同的探針結合位點（17，18）。所述熒光探針的至少一種被設置用于在擴增子中與引物結合位點（13、14）之外的靶DNA（11）片段結合，并且所述熒光探針的至少一種被設置用于在擴增子中與引物結合位點（13、14）之外的參比DNA（12）片段結合。

本發明涉及反應混合物，其提供用于進行定量實時PCR的反應批次，以及涉及用于進行定量實時PCR的方法和涉及試劑盒。

現有技術

聚合酶鏈反應（PCR）是一種非常靈敏的生物分析方法。借助于酶，即DNA聚合酶，基于作為模板的DNA序列擴增DNA。在此，在各個循環中形成的產物用作各自下一個循環的模板。待復制的DNA在此被稱為模板（模板DNA）。此外，需要所謂的引物，其在DNA的單鏈上分別規定DNA合成的起點。DNA合成在使用脫氧核苷酸的情況下通過溫度穩定的DNA聚合酶被催化。對于各個PCR循環，首先進行雙鏈DNA變性（解鏈），然后再進行引物雜交，即引物可結合到單鏈DNA的互補序列片段上（引物退火）。接著，DNA聚合酶附著，并且在所謂的延伸步驟（延伸）中發生引物的互補延伸。這些各個步驟由溫度循環來控制。

PCR的一個實施方案是實時PCR（qPCR），在其中可以借助于熒光探針來追蹤反應進程。在此，實時PCR允許定量模板DNA的起始量。通常，為此需要在并行反應批次中隨同進行的參比測量。除定量參比測量外，在標準方式中也隨同進行定性對照，以便能夠排除假陽性或假陰性結果。

發明公開內容

發明優點

本發明提供了反應混合物，其被設置用于提供用于進行定量實時PCR的反應批次。利用該反應混合物，可以定量DNA序列，例如基因片段的DNA序列，其中，并行標準反應已經被集成到各自的反應批次或反應混合物中，因此不需要隨同進行并行標準反應和對照反應。在此，特別的優點在于，可以在同一個反應批次（PCR批次）中測量所述定量和質量控制。就此而言，反應批次應理解為是指反應在一個反應容器中進行。因此，沒有必要隨同進行參比測量，從而可以大大節省PCR批次的費用。這可以提供相當大的優勢，例如特別是在即時檢測（PoC）應用中，因為在這種應用中通常直接為患者進行檢查。在傳統方法中，通常為此需要為各個患者準備相應的參比測量并且并行地隨同進行。當使用本發明的反應混合物時，不需要這樣。因此，可以有利地特別是在醫學診斷中使用本發明的反應混合物和可借其進行的方法。