[發明專利]用于檢測抗藥抗體的方法

在審

• 申請號: 201980051334.2
• 申請日: 2019-08-02
• 公開（公告）號: CN112534263A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 徐衛鋒;R·C·佩魯特拉
• 申請（專利權）人: 百時美施貴寶公司
• 主分類號: G01N33/564
• 分類號: G01N33/564;G01N33/574
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 封新琴

在某些實施方案中，本發明提供了一種用于檢測樣品中的抗藥抗體(ADA)的方法，其包括：a)在高溫下預處理所述樣品以解離所述樣品中的ADA:藥物免疫復合物；b)通過基質從所述樣品中分離出所述ADA；c)使用緩沖液從所述基質中回收所述ADA；以及d)在基于細胞的測定或體外測定中檢測所述ADA。

相關申請的交叉引用

本申請要求2018年8月3日提交的美國臨時申請號62/714,183的優先權權益，將其通過引用以其整體并入本文。

背景技術

生物治療劑是外來抗原，并且可能潛在地誘導免疫反應，從而導致抗藥抗體(ADA)的形成，這進而可能導致廣泛的副作用。中和抗體(NAb)屬于ADA的一個子集，其可以與治療劑的藥理活性區域結合，以抑制或完全中和其臨床功效。優選基于細胞的功能性NAb測定來表征其中和活性。然而，基于細胞的NAb測定通常容易受到藥物干擾以及眾多血清因子(包括但不限于生長因子和疾病相關細胞因子)干擾的影響。珠提取與酸解離(BEAD)已經成功應用于從人血清樣品中去除循環藥物和/或其他干擾因子，從而富集ADA/NAb。然而，提取程序中使用的強酸可能引起NAb的不可逆變性，并且導致NAb測量值被低估。因此，需要開發用于檢測中和抗藥抗體的新穎方法。

發明內容

在某些實施方案中，本發明提供了一種用于檢測樣品中的抗藥抗體(ADA)的方法。這樣的方法包括：a)在高溫下預處理所述樣品以解離所述樣品中的ADA:藥物免疫復合物；b)通過基質從所述樣品中分離出所述ADA；c)使用緩沖液從所述基質中回收所述ADA；以及d)在基于細胞的測定或體外測定中檢測所述ADA。任選地，所述高溫在60℃與68℃之間(例如，約60℃、約61℃、約62℃、約63℃、約64℃、約65℃、約66℃、約67℃或約68℃)。任選地，將所述樣品在所述高溫下預處理約30分鐘與約2小時之間的時間(例如，約30-60分鐘)，如約30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115或120分鐘。

在某些特定的實施方案中，所述ADA對酸處理敏感。在某些特定的實施方案中，所述藥物具有比所述ADA低的熱穩定性。

任選地，所述藥物選自抗體或其片段、核酸、肽、多肽、擬肽、碳水化合物、脂質或小分子化合物。任選地，所述樣品是選自以下的生物樣品：體液、粘液分泌物、唾液、血液、全血、血漿和血清。任選地，所述樣品來自已經用所述藥物治療過的受試者。

在某些特定的實施方案中，通過與生物素化的藥物接觸，然后與鏈霉親和素包被的基質接觸，從所述樣品中分離出所述ADA。可替代地，通過與所述藥物偶聯的基質從所述樣品中分離出所述ADA。例如，所述基質是磁珠。

在某些特定的實施方案中，在基于細胞的測定中檢測所述回收的ADA。例如，這樣的測定包括：i)在所述藥物的存在下將所述回收的ADA添加到細胞中；以及ii)通過測量所述藥物對所述細胞的活性降低來檢測所述ADA。

在某些特定實施方案中，在體外測定中檢測所述回收的ADA。例如，這樣的測定包括：i)使所述回收的ADA與用可檢測標記物標記的所述藥物接觸；以及ii)通過測量所述可檢測標記物來檢測所述ADA。舉例而言，所述可檢測標記物是選自以下的標記物：放射性同位素、酶、熒光標記物、化學發光標記物和電化學發光標記物以及用于酶促檢測反應的底物。

在某些特定的實施方案中，所述藥物是抗體片段，如結構域抗體。在某些特定的實施方案中，所述藥物是聚乙二醇化的。

在某些特定的實施方案中，所述藥物是魯利珠單抗(lulizumab)(即，聚乙二醇化的抗CD28結構域抗體)。例如，在約62℃的高溫下預處理此藥物。例如，在所述血清樣品中檢測所述ADA。

附圖說明