[發明專利]蛋白質和細胞的聚糖分析

有效

• 申請號: 201980051037.8
• 申請日: 2019-06-03
• 公開（公告）號: CN112654642B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 阿南德·梅赫塔;理查德·R·德雷克;布里安·哈布;佩吉·M·安格爾
• 申請（專利權）人: MUSC研究發展基金會;范安德爾研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;G01N33/53
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 曲在丹

1.一種用于對至少一個樣品進行聚糖分析的方法，所述方法包括以下步驟：

提供具有用多種抗體點樣的表面的基底；

在封閉溶液中孵育所述基底；

在至少一個樣品中孵育所述基底，其中所述至少一個樣品包含蛋白質溶液；

用酶促釋放溶液對所述基底進行噴霧；以及

通過質譜掃描所述基底以檢測和鑒定聚糖的存在。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述至少一個樣品包含至少一個細胞群。

3.根據權利要求2所述的方法，其中在用酶促釋放溶液對所述基底進行噴霧的步驟之前將所述至少一個細胞群在固定和漂洗劑中孵育。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述固定和漂洗劑選自：福爾馬林、卡諾氏溶液、多聚甲醛、基于乙醇的固定劑、和基于聚乙二醇的固定劑。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述基底是玻璃或塑料顯微鏡載玻片或多孔板。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述封閉溶液是血清。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述血清是在PBS和去污劑中的1％BSA。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述封閉溶液通過包括3×PBS浴和1×水浴的洗滌步驟去除。

9.根據權利要求1所述的方法，其中將所述至少一個樣品在室溫下在潮濕室中孵育兩小時。

10.根據權利要求1所述的方法，其中所述酶促釋放溶液包含PNGase?F。

11.根據權利要求1所述的方法，其中所述質譜選自由以下各項組成的組：基質輔助激光解吸/電離成像傅里葉變換離子回旋共振(MALDI-FTICR)質譜、基質輔助激光解吸/電離飛行時間(MALDI-TOF)質譜、掃描微探針MALDI(SMALDI)質譜、紅外基質輔助激光解吸電噴霧電離(MALD-ESI)質譜、表面輔助激光解吸/電離(SALDI)質譜、解吸電噴霧電離(DESI)質譜、二次離子質譜(SIMS)質譜和簡易敞開式聲波噴霧電離(EASI)質譜。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述掃描步驟之前是用MALDI基質材料對所述基底進行噴霧的步驟。

13.根據權利要求12所述的方法，其中MALDI基質溶液選自由以下各項組成的組：2,5-二羥基苯甲酸、α-氰基-4-羥基肉桂酸、芥子酸、1,5-二氨基萘和9-氨基吖啶。

14.根據權利要求1所述的方法，其中所述多種抗體特異性地結合選自由以下各項組成的組的蛋白質：A1AT、胎球蛋白-A、血液結合素、Apo-J、LMW激肽原、HMW激肽原、apo-H、轉鐵蛋白、IgG、IgM、IgA、纖連蛋白、層粘連蛋白、血漿銅藍蛋白、腓骨蛋白、血管緊張素原、原纖維蛋白1、TIMP1、凝血酶敏感蛋白1、半乳糖凝集素-3結合蛋白、補體C1?R、叢生蛋白、半乳糖凝集素1、α-2-巨球蛋白、維生素D結合蛋白、富組氨酸糖蛋白、CD109、CEA、組織蛋白酶、AFP、GP73l及它們的組合。

15.根據權利要求13所述的方法，其中所述抗體可用于檢測肝細胞癌的存在。

16.一種用于對至少一個細胞群進行聚糖分析的方法，所述方法包括以下步驟：

將至少一個細胞群粘附到基底表面，其中所述至少一個細胞群包含培養的或捕獲的細胞；

固定和漂洗所述至少一個細胞群；

用酶促釋放溶液對所述基底進行噴霧；以及

通過質譜掃描所述基底以檢測和鑒定聚糖的存在。