[發明專利]具pH選擇性的條件活性蛋白質

在審

• 申請號: 201980051029.3
• 申請日: 2019-08-20
• 公開（公告）號: CN112566929A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 杰·M·少特
• 申請（專利權）人: 生物蛋白有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;G01N33/68;A61P19/02;A61P25/00;A61P35/00;A61K39/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 孫永梅;趙永莉

1.一種自親本多肽產生條件活性多肽的方法，其包括以下步驟：

(i)通過將一或多個突變引入到所述親本多肽中來進化所述親本多肽以產生pI等于或低于所述親本多肽的pI的一或多個突變多肽；

(ii)使所述一或多個突變多肽經受正常生理條件下的第一分析以測量所述一或多個突變多肽在所述正常生理條件下的活性，及使所述一或多個突變多肽經受異常條件下的第二分析以測量所述一或多個突變多肽在所述異常條件下的活性，其中所述正常生理條件及所述異常條件為相同條件但具有不同值；以及

(iii)從所述一或多個突變多肽中選擇所述條件活性多肽，相比于在所述第一分析中的相同活性，所述條件活性多肽在所述第二分析中表現出增加的活性。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述條件活性多肽的pI低于所述親本多肽的所述pI。

3.根據權利要求1到2中任一權利要求所述的方法，其中所述條件活性多肽具有低于7.4的pI、或低于7.3的pI、或低于7.2的pI、或低于7.1的pI或低于7.0的pI。

4.根據權利要求1到3中任一權利要求所述的方法，其中所述一或多個突變包括針對所述親本多肽中的氨基酸殘基的至少一個氨基酸殘基的氨基酸取代，所述氨基酸殘基的pI比取代到所述親本多肽中的所述氨基酸的pI高。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述一或多個突變包括所述取代中的2、3、4、5、6、7、8、9或10個取代。

6.根據權利要求1到5中任一權利要求所述的方法，其中所述一或多個突變包括至少一個氨基酸殘基的插入，所述氨基酸殘基的pI低于所述親本多肽的所述pI。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述一或多個突變包括所述插入中的2、3、4或5個插入。

8.根據權利要求1到7中任一權利要求所述的方法，其中所述一或多個突變包括至少一個氨基酸殘基的缺失，所述氨基酸殘基的pI高于所述親本多肽的所述pI。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述一或多個突變包括所述缺失中的2、3、4或5個缺失。

10.根據權利要求1到9中任一權利要求所述的方法，其中所述突變中的一或多個突變定位于暴露在所述突變多肽的表面上的位置中。

11.根據權利要求1到10中任一權利要求所述的方法，其中所述進化步驟包括將一或多個額外突變引入到所述突變多肽中。

12.根據權利要求1到11中任一權利要求所述的方法，其進一步包括步驟(ii)之前的用于確定至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少95％、或至少98％的所述突變多肽的pI等于或低于所述親本多肽的所述pI的步驟。

13.根據權利要求12所述的方法，其進一步包括在步驟(ii)之前舍棄pI大于所述親本多肽的所述pI的突變多肽的步驟。

14.根據權利要求1到13中任一權利要求所述的方法，其進一步包括測量所述條件活性多肽的pI的步驟。

15.根據權利要求1到14中任一權利要求所述的方法，其中所述條件活性多肽的所述pI低于所述親本多肽的所述pI至少0.1、或至少0.2、或至少0.3、或至少0.4、或至少0.5、或至少0.6、或至少0.8、或至少1.0、或至少1.2、或至少1.4、或至少1.5、或至少1.7、或至少2.0、或至少2.5、或至少3.0、或至少3.5、或至少4.0、或至少5.0個單位。