[發(fā)明專利]腺相關(guān)病毒的肝臟特異性嗜性

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980042499.3
• 申請(qǐng)日: 2019-05-10
• 公開（公告）號(hào): CN112368391A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: L.H.范登伯格;P.施密特;C.蒂珀;C.昂祖;E.津恩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 馬薩諸塞眼科耳科診所;司科彭斯眼部研究學(xué)會(huì)
• 主分類號(hào): C12N15/864
• 分類號(hào): C12N15/864;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 易方方

1.一種改變腺相關(guān)病毒(AAV)載體的組織嗜性的方法，所述方法包括：

定位AAV衣殼蛋白內(nèi)對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置266或?qū)?yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置168的氨基酸位置；并且

將對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置266的定位的位置的天然存在的氨基酸替代為甘氨酸(G)氨基酸殘基以增強(qiáng)所得AAV載體的肝臟嗜性，或替代為丙氨酸(A)氨基酸殘基以降低所得AAV的肝臟嗜性，或者

將對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置168的定位的位置的天然存在的氨基酸替代為精氨酸(R)氨基酸殘基以增強(qiáng)所得AAV載體的肝臟嗜性，或替代為賴氨酸(K)氨基酸殘基以降低所得AAV的肝臟嗜性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，包括將對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置266的所述定位的位置的所述天然存在的氨基酸替代為G氨基酸殘基以增強(qiáng)所述所得AAV載體的肝臟嗜性。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，包括將對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置266的所述定位的位置的所述天然存在的氨基酸替代為A氨基酸殘基以降低所述所得AAV載體的肝臟嗜性。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，包括將對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置168的所述定位的位置的所述天然存在的氨基酸替代為R氨基酸殘基以增強(qiáng)所述所得AAV載體的肝臟嗜性。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，包括將對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置168的所述定位的位置的所述天然存在的氨基酸替代為K氨基酸殘基以降低所述所得AAV載體的肝臟嗜性。

6.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中替代步驟使用定點(diǎn)誘變進(jìn)行。

7.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述替代步驟通過限制性消化以及現(xiàn)有或從頭合成的DNA連接進(jìn)行。

8.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述替代步驟通過現(xiàn)有或從頭合成的DNA的同源性介導(dǎo)的組裝進(jìn)行。

9.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中定位步驟通過測(cè)序進(jìn)行。

10.一種篩選腺相關(guān)病毒(AAV)的肝臟嗜性水平的方法，所述方法包括：

對(duì)編碼AAV衣殼蛋白的核酸進(jìn)行測(cè)序；

定位所述AAV衣殼蛋白內(nèi)對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置266的氨基酸位置或所述AAV衣殼蛋白內(nèi)對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的衣殼蛋白中的位置168的氨基酸位置；并且

鑒定在對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的所述衣殼蛋白中的位置266的所述定位的位置具有G氨基酸殘基或A氨基酸殘基，或者在對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的所述衣殼蛋白中的位置168的所述定位的位置具有R氨基酸殘基或K氨基酸殘基的AAV衣殼蛋白，

其中在對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的所述衣殼蛋白中的位置266的所述定位的位置的G氨基酸殘基或在對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的所述衣殼蛋白中的位置168的所述定位的位置的R氨基酸殘基表明AAV顯示出肝臟嗜性，并且其中在對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQ ID NO:1)的所述衣殼蛋白中的位置266的所述定位的位置的A氨基酸殘基或在對(duì)應(yīng)于在Anc80(SEQID NO:1)的所述衣殼蛋白中的位置168的所述定位的位置的K氨基酸殘基表明AAV顯示出極低或無肝臟嗜性。

11.一種具有SEQ ID NO:1[Anc80]中所示序列的腺相關(guān)病毒(AAV)，其中在位置266的X₃選自G或A，或者其中在位置168的X₁選自R或K。