[發(fā)明專利]用包含NC-1-Fc的蛋白寡聚體治療血管發(fā)生、纖維化和癌癥相關(guān)疾病的手段和方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980038342.3
• 申請(qǐng)日: 2019-04-16
• 公開（公告）號(hào): CN112236448A
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 卡什·賈瓦海里恩;約根·德布斯;阿米爾·阿布多拉希
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海德堡生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/78
• 分類號(hào): C07K14/78;A61K38/00
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 柴云峰;張瑩

1.生產(chǎn)包含至少兩個(gè)，且優(yōu)選三個(gè)異源二聚體人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚體的方法，所述方法包括：

a)在允許形成包含至少兩個(gè)，且優(yōu)選三個(gè)異源二聚體人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚體的條件下，培養(yǎng)表達(dá)(i)和(ii)的宿主細(xì)胞，所述(i)為融合蛋白，其從N-至C-端包含融合至具有“杵”突變的人IgG1 Fc的來自膠原蛋白18的人NC-1，或融合至來自膠原蛋白18的人NC-1的具有“杵”突變的人IgG1 Fc，所述(ii)為具有“臼”突變的人IgG1 Fc，其中(i)所述的融合蛋白和(ii)所述的具有“臼”突變的人IgG1 Fc以2∶1或更高的比例表達(dá)，以及

b)從步驟a)的所述宿主細(xì)胞中獲得包含至少兩個(gè)，且優(yōu)選三個(gè)異源二聚體人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚體。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其進(jìn)一步包括步驟c)，其中三聚體的形成通過交聯(lián)非變性的異源二聚體人NC-1-Fc蛋白來測(cè)試。

3.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中人IgG1 Fc包含“杵”突變S354C/T366W，和具有“臼”突變Y349C/T366S/L368A/Y407V的人IgG1 Fc。

4.權(quán)利要求1、2或3所述的方法，其中具有“杵”突變S354C/T366W的人IgG1 Fc包含SEQID NO:25，且具有“臼”突變Y349C/T366S/L368A/Y407V的人IgG1 Fc包含SEQ ID NO:26。

5.生產(chǎn)包含至少兩個(gè)，且優(yōu)選三個(gè)單體人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚體的方法，所述方法包括：

a)在允許形成包含至少兩個(gè)，且優(yōu)選三個(gè)單體人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚體的條件下，培養(yǎng)表達(dá)融合蛋白的宿主細(xì)胞，所述融合蛋白從N-至C-端包含融合至人IgG1 Fc的來自膠原蛋白18的人NC-1，或融合至來自膠原蛋白18的人NC-1的人IgG1 Fc，其中所述人IgG1 Fc包含至少一個(gè)單體突變，優(yōu)選地單體突變F405R，和一個(gè)或更多個(gè)半衰期延長(zhǎng)突變，優(yōu)選半衰期延長(zhǎng)突變M252Y、S254T和T256E，以及

b)從步驟a)的所述宿主細(xì)胞中獲得包含至少兩個(gè)，且優(yōu)選三個(gè)單體人NC-1-Fc蛋白的蛋白寡聚體。

6.蛋白寡聚體，其包含至少兩個(gè)，且優(yōu)選三個(gè)異源二聚體人NC-1-Fc蛋白，所述蛋白寡聚體用于治療、改善或預(yù)防血管發(fā)生相關(guān)疾病，其中所述異源二聚體人NC-1-Fc蛋白包含(i)融合蛋白，其從N-至C-端包含融合至具有“杵”突變的人IgG1 Fc的來自膠原蛋白18的人NC-1，或融合至來自膠原蛋白18的人NC-1的人IgG1 Fc，和(ii)具有“臼”突變的人IgG1 Fc，其中人IgG1 Fc中的所述“杵”突變和“臼”突變?nèi)鐧?quán)利要求3或4中定義。

7.如權(quán)利要求6所述用途的蛋白寡聚體，其中所述血管發(fā)生相關(guān)疾病選自由以下各項(xiàng)組成的組：血管發(fā)生依賴性癌癥，包括實(shí)體瘤，黑素瘤，腫瘤轉(zhuǎn)移瘤，血源性腫瘤，如白血病，良性腫瘤，如血管瘤，聽神經(jīng)瘤，神經(jīng)纖維瘤，沙眼，化膿性肉芽腫；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；銀屑病；眼部血管發(fā)生疾病如糖尿病性視網(wǎng)膜病變，早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變，黃斑變性，角膜移植片排斥，新生血管性青光眼，晶狀體后纖維組織形成，發(fā)紅(rubeosis)；Osler-Webber綜合征；心肌血管發(fā)生；斑塊新血管形成；毛細(xì)管擴(kuò)張；血友病關(guān)節(jié)；血管纖維瘤；傷口肉芽；過度或異常刺激內(nèi)皮細(xì)胞的疾病如腸粘連，動(dòng)脈粥樣硬化，硬皮病，肥大性疤痕(疤痕疙瘩)；具有血管發(fā)生作為病理結(jié)果的疾病，例如貓抓病(Rochele minalia quintosa)和潰瘍(幽門螺桿菌)。

8.單體NC-1-Fc蛋白，其包含來自膠原蛋白18的人NC-1和來自人IgG1的Fc結(jié)構(gòu)域，其中來自人IgG1的Fc結(jié)構(gòu)域包含至少一個(gè)單體突變，優(yōu)選地單體突變F405R，和一個(gè)或更多個(gè)半衰期延長(zhǎng)突變，優(yōu)選半衰期延長(zhǎng)突變M252Y、S254T和T256E。