[發明專利]早期檢測禽種群中壞死性腸炎爆發的方法

在審

• 申請號: 201980038273.6
• 申請日: 2019-06-07
• 公開（公告）號: CN112236533A
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: E·I·伊格威;F·波爾;A·卡佩爾;F·斯爾曼;M·威絲曼;D·L·維柯爾;K·馬丁;C·米都布魯克斯;S·提歷;J·史密斯
• 申請（專利權）人: 贏創運營有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/689
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 張小勇

1.早期檢測禽種群中壞死性腸炎爆發的體外方法，該方法包括：

a)在連續的時間點收集源自禽種群的糞便樣本材料；和

b)確定步驟a)中獲得的樣本材料中所包含的標志物基因netB與cpa的量的比；

其中netB與cpa的量的比隨時間的逆轉是壞死性腸炎爆發的早期指示。

2.根據權利要求1所述的方法，其中步驟a)的糞便樣本材料是來自隨機選擇的個體樣本的復合糞便樣本。

3.根據權利要求2所述的方法，其中使用下式來確定待采樣的數量：

其中

n₀是樣本量建議

95％置信水平下的Z為1.96

p是具有問題屬性q的種群的估計部分，其中q為1-p，并且

e是以小數表示的置信區間。

4.根據權利要求2或3中任一項所述的方法，其中所述復合糞便樣本通過下述方式獲得：

(a1)將動物房或飼養動物種群的區域劃分為均勻單元的網格圖案；

(a2)識別第一單元內的至少一個隨機樣本收集點，并在所述至少一個樣本收集點收集一個第一樣本；和

(a3)在每個單元內使用相同的相對樣本收集點，依次收集其余單元內的個體糞便樣本；

以及任選地

(a4)對至少一個重復樣本重復步驟(a2)和(a3)。

5.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述禽種群是肉雞群。

6.根據權利要求5所述的方法，其中從第10天開始，每天收集和分析來自肉雞群的糞便樣本材料。

7.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中在步驟a)中獲得的樣本材料中包含的標志物基因netB與cpa的量的比通過qPCR確定。

8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中一種或多種選自下述的寡核苷酸用作PCR引物和/或PCR探針：

a)與SEQ ID NO：3所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

b)與SEQ ID NO：4所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

c)與SEQ ID NO：5所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

d)與SEQ ID NO：6所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

e)與SEQ ID NO：7所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

f)與SEQ ID NO：8所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

g)與根據(a)至(f)的寡核苷酸互補的寡核苷酸；

h)寡核苷酸，其包含根據(a)至(g)中任一項的寡核苷酸，并且與根據(a)至(g)的寡核苷酸相比被延長不超過5個堿基對。

9.根據權利要求1至9中任一項所述的方法在早期檢測壞死性腸炎爆發中的用途。

10.用于控制禽種群中壞死性腸炎狀況的體外方法，該方法包括監測在連續的時間點收集的糞便樣本中所含的標志物基因netB與cpa的量的比，

其中

a)netB與cpa的量的比隨時間的逆轉表明營養或治療干預的必要性，并且

b)施用營養或治療劑后，netB與cpa的量的比隨時間的再逆轉表明營養或治療干預的有效性。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述營養或治療干預包括施用選自下述的物質：益生菌劑、益生元劑、植物性藥物、有機/脂肪酸、噬菌體和溶菌酶或其任意組合。

12.根據權利要求10和12中任一項所述的方法，其中一種或多種選自下述的寡核苷酸用作PCR引物和/或PCR探針：

a)與SEQ ID NO：3所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

b)與SEQ ID NO：4所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

c)與SEQ ID NO：5所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

d)與SEQ ID NO：6所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

e)與SEQ ID NO：7所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

f)與SEQ ID NO：8所示的多核苷酸具有至少80％，優選至少85、90或95％，最優選100％的序列同一性的寡核苷酸；

g)與根據(a)至(f)的寡核苷酸互補的寡核苷酸；

h)寡核苷酸，其包含根據(a)至(g)中任一項的寡核苷酸，并且與根據(a)至(g)的寡核苷酸相比被延長不超過5個堿基對。