[發(fā)明專(zhuān)利]在輻射滅菌過(guò)程中保護(hù)生物活性分子

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980033117.0
• 申請(qǐng)日: 2019-05-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112135641A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: P·Q·胡;N·P·艾倫;J·L·霍華德;J·鮑伊爾
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 凱杰科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61L2/00
• 分類(lèi)號(hào): A61L2/00;G01N33/543
• 代理公司: 上海專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 張靜;王穎

本發(fā)明公開(kāi)了涉及保護(hù)生物活性分子的生物活性免于輻射滅菌期間的輻射損害的組合物和方法，所述生物活性分子包括生物活性蛋白或生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，例如免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。在噴霧干燥到免疫測(cè)定管的表面上的過(guò)程中，在示例性促有絲分裂凝集素制劑中包含至少一種輻射防護(hù)劑化合物(例如，半胱氨酸，還原型谷胱甘肽，褪黑素和/或組氨酸)，令人驚訝地保護(hù)了該凝集素的生物(促有絲分裂)活性免于由于電子束輻射滅菌而導(dǎo)致的損失。輻射防護(hù)劑化合物還可以保護(hù)其他生物活性分子并穩(wěn)定其生物活性，從而使它們?cè)谳椛涮幚砗蟮拈L(zhǎng)時(shí)間保存后仍具有生物活性。

背景技術(shù)

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)施方案總體上涉及體外生物學(xué)測(cè)定。更具體地，本公開(kāi)涉及保存、保護(hù)和/或恢復(fù)和/或穩(wěn)定生物活性分子的生物活性的組合物和方法，所述生物活性分子包括但不限于生物活性蛋白和/或生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，例如免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，否則其活性在輻射滅菌期間和/或之后會(huì)受到損害和/或減弱。

相關(guān)領(lǐng)域描述

用于從患者獲得的生物樣品中存在的細(xì)胞(例如免疫系統(tǒng)細(xì)胞，例如，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，樹(shù)突狀細(xì)胞或免疫系統(tǒng)其他細(xì)胞)的免疫活性的體外測(cè)定是本領(lǐng)域眾所周知的診斷方法和預(yù)后目的。例如，可以通過(guò)多種測(cè)量方法體外測(cè)試從此類(lèi)樣品分離的全血樣品或白細(xì)胞，以評(píng)估免疫反應(yīng)能力，例如細(xì)胞增殖，可溶性介體釋放和/或響應(yīng)絲裂原、特異性抗原或病原體相關(guān)分子模式(PAMP)、受體和其他激動(dòng)劑的刺激的活化。

絲裂原包括已知刺激細(xì)胞有絲分裂的蛋白質(zhì)，并用作免疫試劑以非抗原特異性方式誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖。淋巴細(xì)胞絲裂原可以是刺激淋巴細(xì)胞增殖和/或釋放/分泌可溶性介體的多克隆激活劑，并且可以通過(guò)利用非抗原刺激驅(qū)動(dòng)的淋巴細(xì)胞分子機(jī)制而繞過(guò)抗原特異性受體(免疫球蛋白(Ig)或T-細(xì)胞受體(TCR))引發(fā)強(qiáng)烈的多克隆反應(yīng)，可以很容易地檢測(cè)到。示例性T-細(xì)胞絲裂原包括生物活性蛋白植物血凝素(PHA)和伴刀豆球蛋白A(ConA)，它們是凝集素(例如植物來(lái)源的碳水化合物結(jié)合蛋白)。另一種凝集素，商陸絲裂原(PWM)能夠刺激T細(xì)胞和B細(xì)胞。已經(jīng)描述了來(lái)自多種來(lái)源的促有絲分裂凝集素(例如Shanmugham等人，2006Riv Biol.99:227；Naeem等人,2007Curr.Protein Pept.Sci 8:261；Singh等人,2014Crit.Rev.Microbiol.40:329)。某些與能激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的淋巴細(xì)胞表面分子特異性結(jié)合的抗體也可以用作絲裂原。

因此，通過(guò)引發(fā)/刺激在樣品中容易測(cè)量的穩(wěn)健的多克隆反應(yīng)，絲裂原特別適用于評(píng)估含淋巴細(xì)胞的樣品的總體免疫反應(yīng)性，其中，由于信號(hào)強(qiáng)度低或抗原特異性反應(yīng)淋巴細(xì)胞的頻率低，單克隆或寡克隆反應(yīng)的免疫檢測(cè)可能不夠靈敏。

例如，TB Gold絲裂原對(duì)照測(cè)定(例如，Mazurek等人,2005MMWRRecomm.Rep 54:49-55；Mazurek等人,2010MMWR Recomm.Rep.59:1-25；Simpson等人,2012Heart Lung 41:553；Cho等人,2012Tuberc.Respir.Dis.(Seoul)72:416；Woo等人,2014Clin.Chim.Acta 430:79)采用生物活性蛋白PHA(一種凝集素)作為多克隆絲裂原，以誘導(dǎo)強(qiáng)烈的體外T細(xì)胞反應(yīng)，從而可以評(píng)估樣品中T細(xì)胞的免疫反應(yīng)狀態(tài)。在該測(cè)試中，方便地以干燥形式提供PHA，作為在采血管的內(nèi)表面上的涂層。通過(guò)在內(nèi)表面上噴霧干燥含PHA的溶液，然后進(jìn)行輻射滅菌(例如電子束輻射，γ射線輻照等)以殺死或滅活任何可能存在的微生物污染物，可以制備絲裂原涂覆的試管。使用化學(xué)物質(zhì)代替輻射來(lái)達(dá)到無(wú)菌環(huán)境可能不是理想的，因?yàn)榛瘜W(xué)物質(zhì)可能會(huì)在刺激過(guò)程中干擾細(xì)胞的生物活性和/或干擾其他檢測(cè)系統(tǒng)。電子束輻射是本領(lǐng)域已知的用于對(duì)生物活性蛋白進(jìn)行這種輻射滅菌的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(例如，Smith等人,2016Health Phys.111(2增補(bǔ)2):S141；Silindir等人,2012PDA J PharmSci Technol.66:184；Mehta等人,1993Med Device Technol.4:24；Yaman,2001Curr.Opin.Drug Devel.4:760)。