[發明專利]連接酶篩選測定

在審

• 申請號: 201980032515.0
• 申請日: 2019-03-18
• 公開（公告）號: CN112119165A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 薩特帕爾·弗迪;鮑冠全
• 申請（專利權）人: 敦提大學
• 主分類號: C12Q1/25
• 分類號: C12Q1/25
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩

1.用于鑒定MYCBP2調節劑的方法，所述方法包括：

a)使MYCBP2，其直系同源物，突變體或片段與測試物質接觸；

b)提供探針，所述探針能夠與活性MYCBP2的C4520，C4572和/或介導環區(殘基4515-4531)相互作用；和

c)檢測與不存在所述測試物質時的相互作用的水平相比，所述探針與MYCBP2，其直系同源物，突變體或片段相互作用的水平是否被調節。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，探針包括活性MYCBP2的非內源性底物。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，調節劑為抑制劑，且步驟c)包括檢測與不存在所述測試物質時的相互作用的水平相比，所述探針與MYCBP2，其直系同源物，突變體或片段相互作用的水平是否降低。

4.根據權利要求1～3中任一項所述的方法，其中，所述探針包括羥基，所述探針能夠經由所述羥基與活性MYCBP2的C4520及任選地與C4572相互作用。

5.根據權利要求1～3中任一項所述的方法，其中，所述探針與MYCBP2的C4572相互作用，并包含根據下式(I)的活化生物分子：

其中，X為生物分子且EWG為吸電子基。

6.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述方法不包括提供內源性MYCBP2底物，ATP，E1和/或E2。

7.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述探針綴合至表面。

8.根據權利要求4所述的方法，其中，相互作用包括所述羥基通過MYCBP2，其直系同源物，突變體或片段與泛素的酯化。

9.根據權利要求8所述的方法，其中，所述探針包含肽。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其中，所述探針包含蘇氨酸或絲氨酸。

11.根據權利要求8所述的方法，其中，所述探針包含小分子。

12.根據權利要求9或12所述的方法，其中，所述探針包含tris，甘油或HEPES。

13.根據權利要求5，或引用權利要求5的權利要求6或7所述的方法，其中，所述活化生物分子包括與下式(II)對應的活化生物分子綴合探針：

其中，X為第一生物分子，EWG為吸電子基且Y為另一生物分子。

14.根據權利要求5，引用權利要求5的權利要求6或7，或權利要求13中的任一項所述的方法，其中，X包含E2酶。

15.根據權利要求13或14所述的方法，其中，Z包含泛素。

16.根據權利要求14所述的方法，其中，E2酶選自UBE2D1，UBE2D2，UBE2D3，UBE2D4和UBE2E1。

17.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述直系同源物選自小鼠Phr1，斑馬魚Esrom/phr1，果蠅Highwire和秀麗隱桿線蟲RPM-1。

18.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述測試物質包括肽，小分子，適體，抗體或抗體片段。

19.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述探針包括標記物。

20.根據權利要求20所述的方法，其中，所述標記物包括親和標簽。