[發(fā)明專利]含有重組蛋白酶抑制劑的組合物及其生產(chǎn)方法和用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980032200.6
• 申請(qǐng)日: 2019-06-06
• 公開（公告）號(hào): CN112437670A
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 米麗婭姆·基德隆;K·阿羅拉;R·納加拉朱;N·M·阿羅拉;P·昆杜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 奧拉姆德有限公司
• 主分類號(hào): A61K38/17
• 分類號(hào): A61K38/17;A61K38/28;A61K38/55;A61K38/56;A61K9/48
• 代理公司: 隆天知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;付文川

本文提供了用于口服施用治療性蛋白和肽的組合物，該組合物含有分離的重組表達(dá)的Bowman?Birk抑制劑(BBI)，并且該組合物提供了治療性蛋白和肽的改進(jìn)的持續(xù)活性。還提供了使用組合物的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本文提供了用于施用治療性蛋白的口服組合物，其含有提供改進(jìn)的持續(xù)活性的重組蛋白酶抑制劑。

背景技術(shù)

基于蛋白/肽的藥物通常易于在胃腸道中降解和/或無(wú)法高效地以生物活性形式從小腸吸收到血流中。已經(jīng)開發(fā)了基于蛋白的藥物如胰島素、艾塞那肽(exenatide)、其他激素等的口服遞送制劑。

源自大豆(Glycine max)的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶抑制劑容易獲得，且認(rèn)為可安全用于人類食用。這種抑制劑的一個(gè)實(shí)例稱為SBTI(大豆胰蛋白酶抑制劑)，其由抑制胰蛋白酶的KTI(Kunitz胰蛋白酶抑制劑)和抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的BBI(Bowman-Birk抑制劑)組成。SBTI已知有許多商業(yè)來源，并且用于分離活性成分的改進(jìn)方法已描述于例如PCT國(guó)際申請(qǐng)公開號(hào)WO/2013/114369中，其全部通過引用以其全文并入本文。

在提供用于口服遞送基于肽的治療劑，特別是用于靶向代謝疾病的治療劑的平臺(tái)技術(shù)方面，已經(jīng)取得了巨大的進(jìn)步和成功，因此似乎很難想象能夠?qū)ζ溥M(jìn)行改進(jìn)以超越當(dāng)前的技術(shù)水平。

發(fā)明概述

令人驚訝的是，現(xiàn)已證明，包含基于肽/蛋白的治療劑、增強(qiáng)劑/穩(wěn)定劑、omega-3脂肪酸和已證明在口服制劑中提供可持續(xù)功效的蛋白酶抑制劑的穩(wěn)定口服組合物在所述蛋白酶抑制劑源自重組來源時(shí)可以得到改進(jìn)。

經(jīng)化學(xué)提取而分別獲得純化KTI和純化BBI的單獨(dú)制備物的SBTI，其具有已知量的BBI和KTI，當(dāng)包含在口服制劑中時(shí)具有已知的純度和活性，且已用于制備有效治療已知疾病的含有蛋白治療劑的口服制劑。例如，在PCT國(guó)際申請(qǐng)公開號(hào)WO/2013/114369(其通過引用以其全文并入本文)中，開發(fā)出了改進(jìn)的SBTI純化方法，在該方法中，每種產(chǎn)品根據(jù)自身的高活性水平的規(guī)格而制備，高分子量(MW)-污染物的水平最小化，并且獲得了高純度的工業(yè)產(chǎn)率的制備物。

令人驚訝的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)鞍酌敢种苿┲苽渥?源自重組異源生產(chǎn)手段時(shí)，即便化學(xué)純化蛋白酶和重組表達(dá)蛋白酶間具有共同的下游純化步驟，所得治療性蛋白/肽在使用重組來源作為初始蛋白酶生產(chǎn)來源時(shí)的活性更大且持續(xù)更長(zhǎng)時(shí)間。

本發(fā)明提供了一種口服藥物組合物，其包含高達(dá)100千道爾頓的治療性肽或治療性蛋白、二價(jià)陽(yáng)離子螯合劑和分離的重組表達(dá)的BBI。

在一些實(shí)施方案中，重組表達(dá)的BBI具有與SEQ ID NO:1中所示核苷酸序列有至少95％同一性的核苷酸序列，或在一些實(shí)施方案中，重組表達(dá)的BBI具有與SEQ ID NO:1中所示核苷酸序列有至少97％同一性的核苷酸序列，或在一些實(shí)施方案中，重組表達(dá)的BBI具有與SEQ ID NO:1中所示核苷酸序列有至少99％同一性的核苷酸序列。在一些實(shí)施方案中，重組表達(dá)的BBI具有SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列。

在一些實(shí)施方案中，重組表達(dá)的BBI在酵母表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，該酵母表達(dá)系統(tǒng)在一些實(shí)施方案中是巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)表達(dá)系統(tǒng)。

在一些實(shí)施方案中，重組表達(dá)的BBI在異源表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，其中根據(jù)用作這種異源表達(dá)系統(tǒng)的生物體中的密碼子使用，對(duì)編碼該BBI的核苷酸序列進(jìn)行優(yōu)化。

在一些實(shí)施方案中，制劑進(jìn)一步包含除所述BBI之外的胰蛋白酶抑制劑，在一些實(shí)施方案中其是KTI3，在一些實(shí)施方案中其被化學(xué)純化，在一些實(shí)施方案中其是重組表達(dá)的。