[發明專利]可注射骨形態發生蛋白

在審

• 申請號: 201980020123.2
• 申請日: 2019-03-14
• 公開（公告）號: CN111867561A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: P·李
• 申請（專利權）人: 華沙整形外科股份有限公司
• 主分類號: A61K9/00
• 分類號: A61K9/00;A61K9/08;A61K47/26;A61K47/18;A61K38/18;A61P19/08
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 楊昀;余穎

提供了一種治療骨缺損的方法。該方法包括將在水性載體中包含約20μg至約5000μg的骨形態發生蛋白?2(BMP?2)的可注射溶液施用至骨缺損。還提供了試劑盒和制備方法。

背景技術

骨缺陷可能由許多不同因素引起，包括但不限于創傷、病理疾病或手術干預。由于骨骼既可以為生物體提供穩定性和保護，因此這些缺陷可能會引起問題。為了解決這些缺陷，已經開發了包含天然和合成材料的組合物和載體。這些組合物和載體可以根據它們中包含的材料用于修復組織并賦予骨缺陷所需的生物學和/或機械性能。

組合物和載體可包含在哺乳動物骨組織中發現的材料，其包含一種或多種蛋白質材料，在生長和天然骨骼愈合期間具有活性，可誘導導致骨骼形成的細胞事件的發育級聯。骨骼中存在各種發育因子。這些包括骨形態發生蛋白(BMP)、其他骨誘導蛋白、骨生長因子或成骨蛋白。

BMP是在轉化生長因子-β(TGF-β)的超家族中的一類被認為在內源性骨組織上具有骨誘導或生長促進活性的蛋白質，或作為前膠原前體起作用。由于這些特性，BMP通常與組合物和載體(例如，骨支架和基質)結合使用，以在骨缺損部位和骨空隙部位形成骨。例如，骨形態發生蛋白2(BMP-2)通常放置在膠原蛋白載體上，并植入目標組織部位。植入膠原蛋白載體后，它將變成固定的基質，并且BMP-2會將成骨細胞和破骨細胞吸入基質中，從而形成新的融合骨。含有BMP-2的基質將促進骨骼細胞的遷移、增殖和分化，從而促進骨骼再生。

通常，認為BMP-2需要在固定基質上遞送才能使其有效。認為要使BMP-2保持生物活性，需要固定的基質來保持蛋白質氨基酸的至少一個核心序列的構象完整性，同時保護蛋白質的多個功能基團不被降解。認為基質可保護未釋放的蛋白質免于與體液直接接觸，體液可降解該蛋白質。

然而，在不需要固定基質的情況下，例如在基質可能移位并形成不需要的血栓形成的高流通區域中的骨缺損，將更需要可注射的溶液。此外，由于基質的尺寸，當將基質經皮注射到目標骨缺損部位時可能存在困難，需要新的骨形成溶液。因此，將BMP遞送至骨缺損的新方法和組合物將是有益的。此外，還期望有一種新的給藥方案，該方案允許容易地施用至避免使用固定基質的骨缺損。

發明內容

提供了低劑量的BMP-2組合物(例如20μg至約5000μg)、方法和試劑盒，它們無需固定基質即可進行成骨、骨誘導和/或骨傳導。在某些實施方案中，提供了一種治療骨缺損的方法。該方法包括將在水性載體中包含20μg至約5000μg的骨形態發生蛋白2(BMP-2)的可注射溶液施用至骨缺損。水性載體可包含鹽水、右旋糖、注射用無菌水、磷酸鹽緩沖鹽水、血液或其組合。在一些實施方案中，將可注射溶液作為單劑量注射施用至骨缺損，并且BMP-2是rhBMP-2。在一些實施方案中，將可注射溶液經皮施用至長骨折；例如，將可注射溶液直接注射到具有血腫的骨折部位；或水性載體不是骨誘導性或骨傳導性的。

在一些實施方案中，提供了制備可注射的骨形態發生蛋白2溶液的方法。該方法包括將800μg至約5000μg的凍干的骨形態發生蛋白2(BMP-2)與水性載體混合以形成可注射的骨形態發生蛋白2溶液。BMP-2可以是rhBMP-2，并且在一些實施方案中，水性載體包括鹽水、右旋糖、注射用無菌水、磷酸鹽緩沖鹽水、血液或其組合。在一些實施方案中，可注射溶液還包含緩沖劑，該緩沖劑包括三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸(EDTA)、(2-[4-(2-羥乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸)(HEPES)、乙酸鈉、檸檬酸鈉、磷酸鈉、2-(N-嗎啉代)乙磺酸(MES)、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、磷酸鈉、磷酸鉀、氯化鈉、氯化鉀、甘油、氯化鈣、蔗糖、甘氨酸、L-谷氨酸、聚山梨酯、聚山梨酯80或其組合。在一些實施方案中，緩沖劑包括蔗糖、甘氨酸、L-谷氨酸、氯化鈉、聚山梨酯80或它們的組合；緩沖劑在注射溶液中的濃度為約1mM至100mM；或可注射溶液的pH為約4.0至約6.0。