[發明專利]微芯片毛細管電泳測定法及試劑

在審

• 申請號: 201980020003.2
• 申請日: 2019-03-15
• 公開（公告）號: CN111868085A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: T·里爾曼;G·卡羅;J·施奈德海因策;N·M·納爾
• 申請（專利權）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號: C07K16/22
• 分類號: C07K16/22;C07K16/24;G01N33/68
• 代理公司: 北京市君合律師事務所 11517
• 代理人: 何箏;顧云峰

提供用于評估蛋白質藥物產品樣品的純度以及鑒別所述蛋白質藥物產品樣品中的雜質的MCE測定法和試劑。提供用于分析蛋白質藥物樣品中的被分析物的方法。

技術領域

本發明的各方面總體涉及毛細管電泳領域，具體地講涉及微芯片毛細管電泳。

背景技術

實施穩健、可重復、用戶友好的技術對于滿足當今質量控制(QC)實驗室對生物產品的測試需求至關重要。必須進行技術升級以利于提高產出，同時繼續生成高質量的分析數據，并嘗試最大程度地減少無效測試結果和與儀器相關的調查的數量。盡管電泳歷來用于產品純度和片段化分析的QC，但該方法已經從基于凝膠轉變為基于毛細管，最近又轉變為微芯片。微芯片毛細管電泳(MCE)可大幅縮短樣品分析時間，同時維持QC分析所需的性能和可重復性標準(Ouimet,C.等人，Expert Opin Drug Discov.,12(2):213–224(2017))。

盡管MCE已經成為一種很有前途的技術，在制藥工業中越來越多地用于表征生物醫藥、質量控制以及用于藥物發現，但其可容易受到測定法干擾。

因此，本發明的一個目的是提供改善的MCE測定法以及減少測定法干擾的組合物。

本發明的另一個目的是提供用于改善蛋白質藥物產品中雜質的檢測的MCE測定法和組合物。

發明內容

提供用于評估蛋白質藥物產品樣品的純度以及鑒別該蛋白質藥物產品樣品中的雜質的MCE測定法和試劑。提供用于分析蛋白質藥物樣品中的被分析物的方法。優選的蛋白質藥物包括(但不限于)抗體及其抗原結合片段、融合蛋白和重組蛋白。該測定法采用MCE技術來分離、鑒別和量化蛋白質產品以及蛋白質產品中的雜質。雜質包括(但不限于)蛋白質聚集體、蛋白質片段、蛋白質多聚體和測定法污染物。還提供還原性緩沖液和非還原性緩沖液。

一個實施方案提供了一種非還原性水性電泳樣品緩沖液，其含有烷化劑，例如155mM至175mM 2-碘乙酰胺；0.50％至1.5％十二烷基硫酸鋰；和65mM至95mM磷酸鈉，其中水性電泳樣品緩沖液具有小于7的pH。在一個優選的實施方案中，該緩沖液的pH為6。在另一個實施方案中，該水性緩沖液含有166mM 2-碘乙酰胺、0.81％十二烷基硫酸鋰和81mM磷酸鈉。

還提供還原性緩沖液。在一個實施方案中，該還原性緩沖液是含有0.5％至1.5％十二烷基硫酸鋰、55mM至85mM磷酸鈉和還原劑的水性電泳樣品緩沖液，其中該水性電泳樣品緩沖液具有大于8的pH。在一個優選的實施方案中，該緩沖液的pH為9。在一個實施方案中，該還原性緩沖液含有135mM至155mM二硫蘇糖醇。另一個實施方案提供含有0.69％十二烷基硫酸鋰、69mM磷酸鈉和142mM二硫蘇糖醇的還原性緩沖液。

HEPES基緩沖液也可以與所公開的方法一起使用。一個實施方案提供了一種非還原性HEPES基水性電泳樣品緩沖液，其含有烷化劑，例如55mM至75mM 2-碘乙酰胺；0.1％至1.0％十二烷基硫酸鋰；5mM至85mM HEPES，和5mM至115mM氯化鈉，其中該水性電泳樣品緩沖液具有小于9的pH。在另一個實施方案中，該緩沖液的pH為8。在另一個實施方案中，該水性緩沖液含有66.4mM 2-碘乙酰胺、0.32％十二烷基硫酸鋰、16.2mM HEPES和48.6mM氯化鈉。

另一個實施方案提供一種還原性HEPES基水性電泳樣品緩沖液，其含有0.05％至0.75％十二烷基硫酸鋰、5mM至115mM氯化鈉、5mM至115mM HEPES和還原劑，其中所述水性電泳樣品緩沖液具有大于7的pH。在一個優選的實施方案中，該緩沖液的pH為8。在一個實施方案中，該還原性緩沖液含有35mM至50mM二硫蘇糖醇。另一個實施方案提供含有0.28％十二烷基硫酸鋰、41.5mM氯化鈉、13.8mM HEPES和42.5mM二硫蘇糖醇的還原性緩沖液。