[發明專利]聚乙二醇化抗凍蛋白及其制備和使用方法

在審

• 申請號: 201980018694.2
• 申請日: 2019-03-14
• 公開（公告）號: CN112135837A
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 勇·巴;穆罕默德·薩拉馬;阿代爾·佩雷斯
• 申請（專利權）人: 勇·巴;穆罕默德·薩拉馬;阿代爾·佩雷斯
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C07K14/415;C07K1/107;A01N1/02
• 代理公司: 四川力久律師事務所 51221
• 代理人: 韓洋

1.一種修飾抗凍蛋白，其特征在于，其化學式為AFP-PEG，其中:

a)AFP是一種抗凍蛋白；

b)PEG是聚(亞烷基二醇)基團；和

c)PEG連接至AFP中的氨基酸，上述氨基酸不參與熱滯后反應且在其側鏈中具有選自胺、硫醇、羥基、羧酸根、酰胺和胍基的官能團。

2.根據權利要求1所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，所述PEG具有化學式R-(OC_aH_2a)_nO-，其中R是烷基，n是為不小于4的整數，并且a是不小于2的整數。

3.根據權利要求2所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，R是C1-C6烷基，并且n是不小于6的整數。

4.根據權利要求3所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，其中n是不大于500的整數，并且a是不大于2的整數。

5.根據權利要求1、2、3或4所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，其中所述PEG基本上由單烷氧基聚(乙二醇)組成。

6.根據權利要求5所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，其中所述PEG具有0.3至20kDa的重均分子量或數均分子量。

7.根據權利要求1、2、3、4、5或6所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，其中所述AFP選自I型、II型、III型、IV型、昆蟲和植物AFP、抗凍糖蛋白(AFGP)、以及這些AFP和AFGP的重組和半胱氨酸替代突變體。

8.根據權利要求7所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，其中所述AFP是III型AFP。

9.根據權利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于：當存在冰時，其使冰在低于0℃的溫度下融化。

10.根據權利要求9所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，其中所述修飾抗凍蛋白與相應的未修飾抗凍蛋白相比，可使冰在更低的溫度下融化。

11.根據權利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9或10所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，其中所述修飾抗凍蛋白與相應的未修飾抗凍蛋白相比，在低于0℃的溫度下抑制冰晶生長的能力更高。

12.根據權利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9或10所述的修飾抗凍蛋白，其特征在于，其中所述修飾抗凍蛋白與相應的未修飾抗凍蛋白相比，在低于0℃的溫度下在相應水溶液中抑制冰的成核能力更強。

13.一種配方，其特征在于，包含：

a)權利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12所述的修飾抗凍蛋白；和

b)足量水以溶解所述修飾抗凍蛋白。

14.根據權利要求13的配方，其特征在于，所述水包含生理相容性緩沖劑。

15.一種冷凍保護劑，其特征在于，包含權利要求13或14所述的配方。

16.一種生物組織，其特征在于，進一步包含權利要求15所述的冷凍保護劑。

17.一種合成修飾抗凍蛋白的方法，其特征在于，包括：

a)使具有氨基酸的抗凍蛋白(AFP)與官能化聚(亞烷基二醇)發生反應，上述氨基酸不參與熱滯后反應，其側基上具有一個功能團(選自：胺、硫醇、羥基、羧酸酯、酰胺和胍基)；而上述官能化聚(亞烷基二醇)的重均分子量或數均分子量為0.3至20kDa，且含有一個反應基可與胺、硫醇、羥基、羧酸根、酰胺或酰胺的反應以形成上述修飾AFP；和

b)純化修飾AFP。