[發明專利]產生天然殺傷細胞的方法和用于治療癌癥的組合物有效
| 申請號： | 201980011279.4 | 申請日： | 2019-01-31 |
| 公開（公告）號： | CN111757745B | 公開（公告）日： | 2022-11-04 |
| 發明（設計）人： | 樸商佑;金容萬;丁在燮;李龍姬 | 申請（專利權）人： | NKMAX有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783;A61K35/17;A61P31/04;A61P31/10;A61P31/12;A61P33/00;A61P43/00 |
| 代理公司： | 北京市鑄成律師事務所 11313 | 代理人： | 郗名悅;劉文娜 |
| 地址： | 韓國*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 產生 天然 殺傷 細胞 方法 用于 治療 癌癥 組合 | ||
1.一種擴增培養中的天然殺傷細胞的方法，其包括：
從血液樣品中分離外周血單核細胞 (PBMC)；
從PBMC中分離CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞中的至少一種；和
在至少兩種細胞因子的存在下，將CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞中的至少一種與飼養細胞的組合共培養；
其中所述飼養細胞的組合包括輻照的Jurkat細胞和輻照的Epstein-Barr病毒轉化的淋巴細胞連續系(EBV-LCL)細胞，
其中所述至少兩種細胞因子包括IL-2和IL-21。
2.權利要求1所述的方法，其中從所述PBMC中分離CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞的至少一種通過使用CD56微珠和CD3微珠中的至少一種進行。
3.權利要求1所述的方法，其中所述至少兩種細胞因子進一步包括選自由IL-15、Flt3-L、SCF、IL-7、IL-18、IL-4、I型干擾素、GM-CSF、IGF 1及其組合組成的組的一種或多種細胞因子。
4.權利要求1所述的方法，其中IL-2以50-1000 lU/mL的濃度添加。
5.權利要求1所述的方法，其中IL-21以10-100 ng/mL的濃度添加。
6.權利要求1所述的方法，其中輻照的Jurkat細胞和輻照的EBV-LCL細胞的比例是1:0.1-5或0.1-5:1。
7.權利要求1所述的方法，其中所述共培養包括共培養1-50天。
8.權利要求1所述的方法，其進一步包括：
在IL-2的存在下，將CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞中的至少一種與所述飼養細胞的組合共培養第一周期；和
在IL-21的存在下，將CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞中的至少一種與所述飼養細胞的組合共培養第二周期。
9.權利要求8所述的方法，其中在所述第二周期的第0-6天期間添加IL-21不止一次。
10.權利要求8所述的方法，其中在所述第二周期的第0-6天期間添加IL-21和所述飼養細胞的組合不止一次。
11.權利要求8所述的方法，其中在所述第二周期期間在每個十四天循環的前六天期間添加IL-21不止一次。
12.權利要求1所述的方法，其中將CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞中的至少一種與所述飼養細胞的組合以CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞和飼養細胞1:1-100的比例共培養。
13.通過權利要求1所述的方法制備的組合物。
14.一種擴增培養中的天然殺傷細胞的方法，其包括：
從血液樣品中分離外周血單核細胞(PBMC)；
從PBMC中分離CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞中的至少一種；和
在至少兩種細胞因子的存在下，將CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞中的至少一種與飼養細胞的組合共培養；
其中所述飼養細胞的組合包括輻照的Jurkat細胞和輻照的Epstein Barr病毒轉化的淋巴細胞連續系(EBV-LCL)細胞，
其中所述至少兩種細胞因子包括IL-2和IL-21，和
其中在培養的擴增期間間隔補充所述飼養細胞和所述細胞因子兩者。
15.權利要求14所述的方法，其中從PBMC中分離CD56+細胞和/或CD3-/CD56+細胞中的至少一種通過使用CD56微珠和CD3微珠中的至少一種進行。
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