[發明專利]從RNA和DNA制備核酸文庫

在審

• 申請號: 201980003307.8
• 申請日: 2019-03-20
• 公開（公告）號: CN111051524A
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 徐紅霞;曹丹;A·阿拉瓦尼斯
• 申請（專利權）人: 伊魯米納公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6869
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳文平;劉盈盈

1.一種用于制備核酸文庫的方法，其包括：

(a)使多個多核苷酸與包含標簽的多個引物雜交，其中所述多個多核苷酸包含RNA和DNA；

(b)用逆轉錄酶延伸所雜交的引物；和

(c)從所延伸的引物和所述DNA產生核酸文庫。

2.權利要求1所述的方法，其還包括(d)測序所述核酸文庫。

3.權利要求2所述的方法，其還包括(e)識別包含所述標簽的多核苷酸序列，從而識別衍生自所述多個多核苷酸的RNA多核苷酸的序列。

4.權利要求3所述的方法，其還包括識別缺少所述標簽的多核苷酸序列，從而識別衍生自所述多個多核苷酸的DNA多核苷酸的序列。

5.權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述多個引物包含不同的序列。

6.權利要求1-5中任一項所述的方法，其中每個引物包含不同的序列。

7.權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述多個引物包含大于10,000種不同的序列。

8.權利要求1-7中任一項所述的方法，其中所述多個引物包含大于100,000種不同的序列。

9.權利要求1-8中任一項所述的方法，其中所述多個引物包含隨機六聚體序列。

10.權利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述多個引物包含相同的標簽。

11.權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述逆轉錄酶缺乏DNA依賴性聚合酶活性。

12.權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述逆轉錄酶選自：禽成髓細胞瘤病毒(AMV)逆轉錄酶、莫洛尼鼠白血病病毒(MMLV)逆轉錄酶、人免疫病毒(HIV)逆轉錄酶、馬傳染性貧血病毒(EIAV)逆轉錄酶、勞斯相關病毒-2(RAV2)逆轉錄酶、C.hydrogenoformans DNA聚合酶、T.thermus DNA聚合酶、T.flavus DNA聚合酶，及其功能性變體。

13.權利要求1-12中任一項所述的方法，其中(b)是在所述DNA多核苷酸的存在下進行。

14.權利要求1-13中任一項所述的方法，其中(b)包括從所述延伸的引物產生雙鏈cDNA。

15.權利要求1-14中任一項所述的方法，其中(c)包括使所述延伸的引物和DNA多核苷酸與選自激酶、連接酶、轉座子、聚合酶、和測序接頭的試劑接觸。

16.權利要求1-15中任一項所述的方法，其中所述多個多核苷酸是無細胞的。

17.權利要求16所述的方法，其中所述多個多核苷酸獲自選自血清、間質液、淋巴液、腦脊液、痰、尿液、乳液、汗液和眼淚的樣品。

18.一種用于制備核酸文庫的方法，其包括：

(a)使多個多核苷酸與多個引物雜交，其中所述多個多核苷酸包含RNA和DNA；

(b)用逆轉錄酶延伸所雜交的引物；和

(c)從所延伸的引物和所述DNA產生核酸文庫。

19.權利要求18所述的方法，其中所述多個多核苷酸是無細胞的。

20.權利要求18或19所述的方法，其中所述多個多核苷酸獲自選自血清、間質液、淋巴液、腦脊液、痰、尿液、乳液、汗液和眼淚的樣品。