[發明專利]一種以丁香酚為底物發酵生成香蘭素的方法

有效

• 申請號: 201911424942.1
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111019995B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: 邢晨光;趙希景;曾雅柔;藍煥炎;劉偉;劉剛;鄧志敏
• 申請（專利權）人: 廈門歐米克生物科技有限公司
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P7/24;C12R1/80;C12R1/07
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 李雁翔;姜謐

1.一種以丁香酚為底物發酵生成香蘭素的方法，其特征在于：以丁香酚為底物，通過Penicillium simplicissimum OMK-68和Bacillus sp. OMK-69混合發酵獲得香蘭素；

其中，Penicillium simplicissimum OMK-68于2019年10月16日保藏于中國典型培養物保藏中心，中國. 武漢. 武漢大學，保藏編號為CCTCC NO：M 2019827；Bacillus sp. OMK-69于2019年10月16日保藏于中國典型培養物保藏中心，中國. 武漢. 武漢大學，保藏編號為CCTCC NO：M 2019826。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）將Penicillium simplicissimum OMK-68和Bacillus sp. OMK-69經無菌YPD平板培養后，再將Penicillium simplicissimum OMK-68經第一種子培養基活化，將Bacillus sp. OMK-69經第二種子培養基活化，獲得Penicillium simplicissimum OMK-68種子液和Bacillus sp. OMK-69種子液；

（2）將Penicillium simplicissimum OMK-68種子液接種于無菌的發酵培養基中，于發酵罐中進行發酵培養10-13h；

（3）將Bacillus sp. OMK-69種子液接種于步驟（2）所得的物料中，繼續于發酵罐中進行發酵培養9-11h；

（4）在步驟（3）所得的物料中加入底物丁香酚，然后每間隔3-5h再添加與第一次添加等量的丁香酚，共添加5-7次，累計共添加丁香酚39-45g/L；

（5）在步驟（4）所得的物料中，純化獲得香蘭素。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述第一種子培養基的配方為：麥芽浸粉28-32g/L，酵母粉13-16g/L，蛋白胨8-12g/L，磷酸二氫鉀1.1-1.3g/L，氯化鈉0.7-0.9g/L，溶劑為水，pH為自然pH。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于：第二種子培養基的配方為：葡萄糖18-22g/L，酵母粉9-11g/L，蛋白胨8-12g/L，磷酸氫二鉀0.7-0.9g/L，氯化鈉0.7-0.9g/L，溶劑為水，pH為自然pH。

5.如權利要求1至4中任一權利要求所述的方法，其特征在于：所述發酵培養基的配方為：葡萄糖28-32g/L，酵母粉18-21g/L，蛋白胨14-16g/L，硫酸鎂0.25-0.32g/L，磷酸二氫鉀0.9-1.1g/L，氯化鈉0.7-0.9g/L，硫酸銨0.9-1.1g/L，溶劑為水，pH為自然pH。

6.一種Penicillium simplicissimum OMK-68，其特征在于：于2019年10月16日保藏于中國典型培養物保藏中心，中國. 武漢. 武漢大學，保藏編號為CCTCC NO：M 2019827。

7.權利要求6所述的Penicillium simplicissimum OMK-68在以丁香酚為底物發酵生產松柏醇中的應用。

8.一種Bacillus sp. OMK-69，其特征在于：于2019年10月16日保藏于中國典型培養物保藏中心，中國. 武漢. 武漢大學，保藏編號為CCTCC NO：M 2019826。

9.權利要求8所述的Bacillus sp. OMK-69在以松柏醇為底物發酵生產香蘭素中的應用。