[發(fā)明專利]一種以丁香酚為底物發(fā)酵生成香蘭素的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201911424942.1 | 申請(qǐng)日： | 2019-12-31 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN111019995B | 公開（公告）日： | 2021-04-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 邢晨光;趙希景;曾雅柔;藍(lán)煥炎;劉偉;劉剛;鄧志敏 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 廈門歐米克生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12P39/00 | 分類號(hào)： | C12P39/00;C12P7/24;C12R1/80;C12R1/07 |
| 代理公司： | 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204 | 代理人： | 李雁翔;姜謐 |
| 地址： | 361000 福建省*** | 國(guó)省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 丁香 發(fā)酵 生成 香蘭素 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種以丁香酚為底物發(fā)酵生成香蘭素的方法，通過Penicillium simplicissimum OMK?68和Bacillus sp.OMK?69混合發(fā)酵獲得香蘭素，效價(jià)高達(dá)35g/L，丁香酚質(zhì)量轉(zhuǎn)化率為83.3％。本發(fā)明中的Penicillium simplicissimum OMK?68能夠以丁香酚為底物，發(fā)酵生產(chǎn)松柏醇，其發(fā)酵效果和底物利用率均遠(yuǎn)好于野生型Penicillium simplicissimum。本發(fā)明中的Bacillus sp.OMK?69能夠以松柏醇為底物，發(fā)酵生產(chǎn)香蘭素，其發(fā)酵效果和底物利用率均遠(yuǎn)好于野生型Bacillus sp。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于香蘭素制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以丁香酚為底物發(fā)酵生成香蘭素的方法。
背景技術(shù)
香蘭素是目前全球使用最多的食品賦香劑之一，有“食品香料之王”的美譽(yù)，是截止2019年全球產(chǎn)量最大的香料之一。
香蘭素天然存在于香莢蘭豆等植物中?？蓮臒釒悴萏m花的豆莢中提取香蘭素，由于香草蘭花莢植物對(duì)土壤及氣候因素的要求非常高，而且天然加工的處理工藝復(fù)雜，所以香蘭素的天然來源非常有限。從天然植物中提取的香蘭素產(chǎn)品在全球產(chǎn)量中的占比不到1％。
為滿足市場(chǎng)的需求，人們開始開發(fā)生物法合成香蘭度的研究。早些時(shí)間Achterholt等開發(fā)了以阿魏酸為底物生物合成香蘭素的工藝。生物法轉(zhuǎn)化阿魏酸合成香蘭素也是目前生物法合成香蘭素最成熟的工藝。稍后人們還研究了以丁香酚為底物，通過微生物代謝積累香蘭素的研究。WO 0026355披露了利用Pseudomonas sp.HR199生物轉(zhuǎn)化丁香酚產(chǎn)生了2.6g/L的香蘭素。Zhao，L.Q.等研究了利用Bacillus fusiformis SW-B9代謝異丁香酚產(chǎn)生了32.5g/L的香蘭素等等。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種以丁香酚為底物發(fā)酵生成香蘭素的方法。
本發(fā)明的具體技術(shù)路線如下：
本發(fā)明的技術(shù)方案之一如下：
一種以丁香酚為底物發(fā)酵生成香蘭素的方法，通過Penicillium simplicissimumOMK-68和Bacillus sp.OMK-69混合發(fā)酵獲得香蘭素；
其中，Penicillium simplicissimum OMK-68于2019年10月16日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC NO：M 2019827；Bacillussp.OMK-69于2019年10月16日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC NO：M 2019826。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，包括如下步驟：
(1)將Penicillium simplicissimum OMK-68和Bacillus sp.OMK-69經(jīng)無菌YPD平板培養(yǎng)后，再分別經(jīng)第一種子培養(yǎng)基和第二種子培養(yǎng)基活化，獲得Penicilliumsimplicissimum OMK-68種子液和Bacillus sp.OMK-69種子液；
(2)將Penicillium simplicissimum OMK-68種子液接種于無菌的所述發(fā)酵培養(yǎng)基中，于發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)10-13h；
(3)將Bacillus sp.OMK-69種子液接種于步驟(2)所得的物料中，繼續(xù)于發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)9-11h；
(4)在步驟(3)所得的物料中加入底物丁香酚，然后每間隔3-5h再添加與第一次添加等量的丁香酚，共添加5-7次，累計(jì)共添加丁香酚39-45g/L；
(5)在步驟(4)所得的物料中，純化獲得香蘭素。
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