[發明專利]一種用于檢測幽門螺桿菌的巢式熒光PCR方法

有效

• 申請號: 201911424740.7
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110951839B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 楊希寅;王春香
• 申請（專利權）人: 泰州健為醫學檢驗實驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京惠智天成知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11681
• 代理人: 王園園

1.一種非疾病診斷目的的用于檢測幽門螺桿菌的巢式熒光PCR方法，其特征在于，所述巢式熒光PCR方法是將巢式PCR的外引物擴增與內引物擴增在同一反應體系中分時段進行，所述反應體系包括巢式熒光PCR反應的外引物、巢式熒光PCR反應的內引物、熒光PCR反應的探針序列和Block序列，所述外引物序列為SEQ ID NO1：5’-CGGTTAAATACCGACCTGCATGAATGGCGTAACGAG-3’，SEQ ID NO2：5’-GCTAACAGAAACATCAAGGGTGGTATCTCAAGGATGGC-3，所述內引物序列為SEQ ID NO3:5’-ATGGGAGCTGTCTCAACCAGAG-3’，SEQ ID NO4:5’-CTCCATAAGAGCCAAAGCCCTTACT-3’，所述探針的序列為SEQ ID NO5：5’-FAM-AGCACTGCTAATGGGAATATCATGCGC-BHQ1-3’，所述Block序列為SEQ ID NO6：5’-CTCGTTACGCCATTCATGC-P-3’，SEQ ID NO7：5’-GCCATCCTTGAGATACCACC-P-3’；反應程序為：95℃，10min，95℃15s，68℃-70℃1min，10個循環，95℃15s，55℃-60℃1min，40個循環；其中所述外引物的退火溫度范圍為68℃-70℃，所述外引物在PCR反應體系中的濃度為20nM-80nM，所述內引物的退火溫度范圍為55℃-60℃，所述內引物在PCR反應體系中的濃度為100nM-400nM，所述內引物濃度為外引物濃度的5-10倍，所述探針的退火溫度在65℃-68℃，探針在PCR反應體系中的濃度為100nM-400nM，所述Block序列3’端均經磷酸化修飾，所述Block序列與所述外引物的3’端序列互補，且互補的退火溫度為55℃-60℃，所述Block序列在PCR反應體系中的濃度為200nM-800nM，所述Block序列濃度為所述外引物濃度的10倍。