[發明專利]一種抗CK18單克隆抗體及其應用

在審

• 申請號: 201911424604.8
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111269314A
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 陳菲;王瑩
• 申請（專利權）人: 蘇州和銳生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司 32232
• 代理人: 何蔚

本發明公開了一種抗CK18單克隆抗體包含重鏈可變區的VHCDR1?3和輕鏈可變區的VLCDR1?3序列及其制備方法和在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)檢測中的應用，當cutoff值設250U/L時，用于診斷NAFLD的靈敏度72％，陰性預測值90％以上。還可應用于NAFLD評估模型。本發明成功獲得鼠單克隆雜交瘤細胞株的基礎上，測序并獲得有效的抗體，應用該重組抗體制備定性或定量檢測試劑盒具有性能穩定，定量準確等優點，能夠實現對樣本中CK18高靈敏度、高特異性快速檢測。

技術領域

本發明涉及免疫學領域，尤其涉及一種抗CK18單克隆抗體及其應用。

背景技術

隨著乙肝疫苗的普及，乙肝新發病人少見，而糖尿病、脂肪肝等富貴病發病率逐年上升。統計表明，我國非酒精性脂肪肝病(NAFLD)已占了肝病總數的50％。NAFLD與乙肝最大的病理區別在于前者肝細胞以凋亡為主，而后者是壞死。肝細胞壞死主要表現為血中肝酶上升，而肝細胞凋亡為主的肝病肝酶往往沒有明顯升高。因此臨床上用肝酶診斷或評估肝細胞凋亡為主的肝病往往效果不佳，亟待一種靈敏度高的肝細胞凋亡特異性指標能彌補這一缺陷。

細胞角蛋白18(CK18)是細胞骨架蛋白的一種，除了起到細胞骨架的支撐作用以外，還通過多種途徑參與著細胞內的各種反應。CK18作為肝細胞凋亡的指標，在包括非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的很多肝臟疾病中都有升高，并且與NAFLD患者肝細胞的脂肪變性、小葉炎癥、氣球樣變的程度及纖維化程度相關，同時有中重度纖維化患者的血清CK18水平明顯高于輕度或無纖維化患者的水平。

當細胞受到損傷性刺激發生凋亡時，多條途徑被激活，同時激活了Caspase系統，Caspase在兩個位點進行切割，這種形式的裂解是高度凋亡特異的，并且凋亡片段對蛋白酶體的降解作用穩定，能夠釋放進入血漿中。M30抗原位于CK18裂解片段中，且只在裂解片段能夠暴露，因此，M30抗體對于上皮細胞的凋亡是具有特異性的。

細胞角蛋白18片段M65(CK18-M65)作為一個無創性的檢測手段，在NAFLD的診斷、NAFL和HASH的鑒別及纖維化程度的判斷上有重要臨床價值。

因此，研制出一種抗CK18的單克隆抗體具有重要的意義。

發明內容

為了解決現有技術的問題，一方面，本發明提供了一種抗CK18單克隆抗體，所述抗CK18單克隆抗體包含重鏈可變區的VHCDR1-3和輕鏈可變區的VLCDR1-3；

VHCDR1：GGATACACATTCACTGAATACAGC

VHCDR2：ATAAATCCTAACAATGGTGGAACT

VHCDR3：GCAAACTAGGTTACGACGGTTTGCCTAC

VLCDR1：CAGAGCCTTGTTCACAGTAATGGAAACACCTAT

VLCDR2：AAAGTTTAC

VLCDR3：TCTCAAAGTACACATGTTCCGTGGACG。

作為本發明實施方式的進一步改進，所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NOs：1-3所示：

SEQ ID NO：1 GYTFTEYS

SEQ ID NO：2 INPNNGGT

SEQ ID NO：3 ANYGYDGFAY。

作為本發明實施方式的進一步改進，所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NOs：4-6所示：

SEQ ID NO：4 QSLFHRNGNTY