[發(fā)明專利]一種結(jié)合抗原A的單克隆抗體及應(yīng)用其的檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911424073.2
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110964105A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳菲;王瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州和銳艾比迪醫(yī)學(xué)檢驗有限公司
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C07K16/44;C12N5/20;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 蘇州華博知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32232
• 代理人: 何蔚

本發(fā)明公開了一種特異性結(jié)合甘露多糖的單克隆抗體的VHCDR1?3和VLCDR1?3序列及其制備方法以及在克羅恩病等疾病方面的應(yīng)用。本發(fā)明克服了甘露多糖免疫原性低，不容易產(chǎn)生鼠抗等問題，在成功獲得鼠單克隆雜交瘤細胞株的基礎(chǔ)上，測序并重組獲得有效的人?鼠嵌合抗體，應(yīng)用該重組抗體制備的抗釀酒酵母細胞抗體定性或定量檢測試劑盒具有性能穩(wěn)定，定量準(zhǔn)確等優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種結(jié)合抗原A的單克隆抗體及應(yīng)用其的檢測試劑盒。

背景技術(shù)

自身抗體檢測是自體免疫性疾病診斷的重要依據(jù)之一，迄今已發(fā)現(xiàn)近千種與自體免疫性疾病相關(guān)的自身抗體，應(yīng)用于臨床診斷的有數(shù)百種，在已商品化的自身抗體檢測試劑中，所用到的標(biāo)準(zhǔn)品通常取自篩選獲得的患者陽性血清，由于陽性血清中的抗體濃度低，非常不穩(wěn)定，無法達到作為標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品的質(zhì)量保證。

對于容易獲得鼠單抗的自身抗原，可以通過制備獲得單克隆抗體，然后重組獲得人源化自身抗體，一定程度上解決了自身抗體質(zhì)控品穩(wěn)定性及定量問題。但對于半抗原，特別是對于鼠類免疫原性較低的自身抗原來說，上述方法無法獲得滿意的自身抗體質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品。比如釀酒酵母細胞壁甘露多糖是包括自體免疫性小血管炎、克羅恩病等的自身抗原，商品化的抗釀酒酵母細胞壁甘露糖抗體檢測試劑(ASCA)雖然有多種，有些用陽性血清作為質(zhì)控品，有些甚至用非特異性的人免疫球蛋白IgG作為質(zhì)控品。上述質(zhì)控品只能作為判斷陰性和陽性的參照，無法進行定量檢測。

而且該方法不適用于對鼠、兔等動物免疫原性低的抗原，比如釀酒酵母細胞壁多糖。

因此，亟待一種人源抗體的制備方法及在自體免疫性疾病診斷中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)的問題，一方面，本發(fā)明提供了一種單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體為結(jié)合抗原A的單克隆抗體，A的結(jié)構(gòu)式如下，

其中n3連接臂，R為偶聯(lián)蛋白；

所述單克隆抗體包含重鏈可變區(qū)的VHCDR1-3和輕鏈可變區(qū)的VLCDR1-3；

VHCDR1：GGCTACACCTTTACTACCTACTGG

VHCDR2：ATTAATCCTACCATTGGTTATACT

VHCDR3：GCAAGATTGGGAAACTATAATAAGGGCTATGCTATGGACTAC；

VLCDR1：GAAAGTGTTGATAATTATGGCTTTAGTTTT

VLCDR2：GCTGCATCC

VLCDR3：CAGCAAAGTAAGGAGGTTCCGTGGACG。

作為本發(fā)明實施方式的進一步改進，所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NOs：1-3所示：

SEQ ID NO：1 ESVDNYGFSF

SEQ ID NO：2 AAS

SEQ ID NO：3 QQSKEVPWT。

作為本發(fā)明實施方式的進一步改進，所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NOs：4-6所示：

SEQ ID NO：4 GYTFTTYW；

SEQ ID NO：5 INPTIGYT；

SEQ ID NO：6 ARLGNYNKGYAMDY。

另一方面，本發(fā)明進一步公開了上述單克隆抗體的制備方法，包括以下步驟之一：