[發(fā)明專利]一種結(jié)合抗原A的單克隆抗體及應(yīng)用其的檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911424073.2
• 申請(qǐng)日: 2019-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN110964105A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳菲;王瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州和銳艾比迪醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/14
• 分類號(hào): C07K16/14;C07K16/44;C12N5/20;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 蘇州華博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32232
• 代理人: 何蔚

1.一種單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體為結(jié)合抗原A的單克隆抗體，A的結(jié)構(gòu)式如下，

其中n3連接臂，R為偶聯(lián)蛋白；

所述單克隆抗體包含重鏈可變區(qū)的VHCDR1-3和輕鏈可變區(qū)的VLCDR1-3；

VHCDR1：GGCTACACCTTTACTACCTACTGG

VHCDR2：ATTAATCCTACCATTGGTTATACT

VHCDR3：GCAAGATTGGGAAACTATAATAAGGGCTATGCTATGGACTAC；

VLCDR1：GAAAGTGTTGATAATTATGGCTTTAGTTTT

VLCDR2：GCTGCATCC

VLCDR3：CAGCAAAGTAAGGAGGTTCCGTGGACG。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單克隆抗體，其特征在于，所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NOs：1-3所示：

SEQ ID NO：1ESVDNYGFSF

SEQ ID NO：2AAS

SEQ ID NO：3QQSKEVPWT。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單克隆抗體，其特征在于，所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的氨基酸序列分別如SEQ ID NOs：4-6所示：

SEQ ID NO：4GYTFTTYW；

SEQ ID NO：5INPTIGYT；

SEQ ID NO：6ARLGNYNKGYAMDY。

4.一種單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、構(gòu)建如權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的重鏈可變區(qū)VHCDR1-3的人鼠嵌合gamma鏈和alpha鏈，其中Fc是人源的；

S2、構(gòu)建如權(quán)利要求1-3所述的輕鏈可變區(qū)VLCDR1-3的鼠源kappa鏈。

S3、將gamma鏈質(zhì)粒和kappa鏈質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，表達(dá)純化獲得含人源Fc的重組單克隆抗體IgG；

S4、將alpha鏈質(zhì)粒和kappa鏈質(zhì)粒共表達(dá)，獲得重組單克隆抗體IgA。

5.一種單克隆雜交瘤細(xì)胞，其特征在于，由權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述抗原A免疫動(dòng)物獲得且分泌得到權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述單克隆抗體。

6.一種單克隆雜交瘤細(xì)胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將抗原A以50-100ug/次皮下注射免疫鼠類，每40-50天重復(fù)一次，重復(fù)10-20次；

S2、取陽(yáng)性鼠脾細(xì)胞與鼠骨髓瘤細(xì)胞SP/20融合，篩選獲得單克隆細(xì)胞。

7.一種權(quán)利要求1所述的單克隆抗體在制備抗釀酒酵母細(xì)胞壁多糖抗體或抗甘露多糖抗體定量測(cè)定試劑盒中的用途。

8.一種權(quán)利要求7所述的抗釀酒酵母細(xì)胞壁多糖或抗甘露多糖抗體定量檢測(cè)試劑盒在克羅恩病早期診斷中的應(yīng)用。

9.一種權(quán)利要求7所述的抗釀酒酵母細(xì)胞壁多糖或抗甘露多糖抗體定量檢測(cè)試劑盒在克羅恩病分期中的應(yīng)用。